白細(xì)胞介素-10（IL-10）和白細(xì)胞介素-16（IL-16）是重要的多效細(xì)胞因子,在特異性和非特異性免疫中發(fā)揮著重要作用。本研究以我國重要的海水養(yǎng)殖魚類斜帶石斑魚為對(duì)象,利用同源克隆以及RACE技術(shù)獲得了斜帶石斑魚IL-10基因cDNA全長,為1104 bp,其ORF為564 bp,編碼187個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)蛋白分子量為21.7 kDa,等電點(diǎn)為5.74,含有信號(hào)肽,無跨膜區(qū)。基于IL-10蛋白氨基酸同源性及進(jìn)化分析顯示,斜帶石斑魚與吉富羅非魚（Oreochromis niloticus）親緣關(guān)系較近,表明所獲得的序列是斜帶石斑魚IL-10基因。根據(jù)GenBank已登錄的基因片段,利用同源克隆和RACE技術(shù)獲得了斜帶石斑魚IL-16基因cDNA序列,全長為2859 bp,其ORF為1896 bp,編碼631個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)蛋白分子量為68.2 kDa,理論等電點(diǎn)為5.36,無信號(hào)肽,無跨膜區(qū)�；贗L-16氨基酸序列的進(jìn)化分析表明斜帶石斑魚與大黃魚（Larimichthys crocea）親緣關(guān)系較近,說明所獲得的序列是斜帶石斑魚IL-16基因。利用雙酶切和質(zhì)粒重組技術(shù)構(gòu)建了重組基因原核... 

【文章來源】：廣東海洋大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 斜帶石斑魚概況
    1.2 細(xì)胞因子
    1.3 白細(xì)胞介素-10
        1.3.1 白細(xì)胞介素-10和白細(xì)胞介素-10家族
        1.3.2 魚類中白細(xì)胞介素-10的研究進(jìn)展
    1.4 白細(xì)胞介素-16
    1.5 本研究的目的意義
2 斜帶石斑魚IL-10和IL-16基因的克隆及其生物信息學(xué)分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)用魚
        2.1.2 載體與菌株
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.5 主要溶液和試劑的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 斜帶石斑魚組織樣品的預(yù)處理
        2.2.2 斜帶石斑魚總RNA的提取
        2.2.3 斜帶石斑魚IL-10和IL-16基因的克隆
        2.2.4 斜帶石斑魚IL-10和IL-16基因序列生物信息學(xué)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 斜帶石斑魚IL-10基因的克隆結(jié)果和分析
        2.3.2 斜帶石斑魚IL-16基因的克隆結(jié)果和分析
    2.4 討論
3 斜帶石斑魚IL-10和IL-16的原核重組表達(dá)
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 菌株和載體
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要溶液
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 IL-10的原核表達(dá)
        3.2.2 IL-16的原核表達(dá)
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 IL-10的原核表達(dá)結(jié)果與分析
        3.3.2 IL-16的原核表達(dá)結(jié)果與分析
    3.4 討論
4 斜帶石斑魚IL-10和IL-16基因組織特異性表達(dá)研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)用魚
        4.1.2 主要試劑和溶液
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 斜帶石斑魚的暫養(yǎng)
        4.2.2 滅活哈維氏弧菌的制備
        4.2.3 斜帶石斑魚免疫實(shí)驗(yàn)和樣品的采集
        4.2.4 熒光定量用引物
        4.2.5 cDNA一鏈的合成
        4.2.6 熒光定量PCR
        4.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 滅活哈維氏弧菌免疫石斑魚前后IL-10和IL-16的組織表達(dá)差異
        4.3.2 滅活哈維氏弧菌免疫石斑魚后IL-10在各組織中的時(shí)空表達(dá)差異
        4.3.3 滅活哈維氏弧菌免疫石斑魚后IL-16在各組織中的時(shí)空表達(dá)差異
    4.4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介
導(dǎo)師簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]紅笛鯛重組激活基因克隆及表達(dá)分析[D]. 張雪利.廣東海洋大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3519824