本實驗以肉食性魚類卵形鯧鲹、珍珠龍膽石斑魚以及草食性魚類草魚為研究對象,采用RACE-PCR技術克隆了卵形鯧鲹GLUT2基因,并分析了三種魚類GLUT2序列差異及其系統(tǒng)進化關系。同時通過養(yǎng)殖實驗進行比較,1)在高糖水平下添加糖酶對卵形鯧鲹生長、糖代謝、消化酶和GLUT2基因表達的影響;2)不同糖脂比條件下添加糖酶對珍珠龍膽石斑魚生長、糖代謝、消化酶和GLUT2基因表達的影響;3)不同糖水平條件下添加糖酶對草魚生長、糖代謝、消化酶和GLUT2基因表達的影響。從而探究不同食性魚類GLUT2的表達差異,解析其在飼料中添加糖酶作用下對不同食性魚類相關糖代謝的調控機制。研究結果如下:1.卵形鯧鲹GLUT2基因分子克隆及序列分析通過RACE技術克隆并鑒定了卵形鯧鲹葡萄糖轉運蛋白2基因（Trachnotus ovatus,To GLUT2）,并在卵形鯧鲹的各組織中進行了表達分析。To GLUT2全長c DNA由2280 bp和32 bp的5’-UTR,1638 bp的開放閱讀框（ORF）和610 bp的3’-UTR組成,編碼546個氨基酸（Gen Bank登錄號:MK649830）。To GLUT2... 

【文章來源】：廣東海洋大學廣東省

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

小腸上皮細胞葡萄糖轉運圖

廣東海洋大學碩士學位論文9盒，每個樣品重復三次。在每個PCR反應結束時進行熔解曲線分析。然后將數(shù)據轉換為Ct值。使用2-△△CT方法經行計算。表2-1GLUT2基因克隆和熒光定量引物Tab.2-1TheprimersequencesdesignedforobtainingtheGLUT2fragmentandformRNAexpressionquantificationUsePrimersnameSequence(5′-3′)UsedforcloneofcorefragmentTo-GLUT2FGGHTACAGTCTTGGAGTCATTo-GLUT2RGAYGAARTTGCWGGTCCAGTTSynthesisofGLUT2for5′RACE5′To-GLUT2-RACE1AATGACAATAGCCAGC5′To-GLUT2-RACE2GTAAAGTTCCCAGAGCCC5′To-GLUT2-RACE3ATAAGCCTTGGGTGCGATSynthesisofGLUT2for3′RACE3′To-GLUT2-RACE1GCCTCCGATTCCAGAACGACTACT3′To-GLUT2-RACE2TCTTTGAAATCGGTCCTGGTCCTAUsedforqPCRoftissuedistributionandexpressionqTo-GLUT2FCTCCGATTCCAGAACGACTACTCqTo-GLUT2RTGGAATAGGACCAGGACCGATUsedasinternalstandardβ-ActinFTACGAGCTGCCTGACGGACAβ-ActinRGGCTGTGATCTCCTTCTGC2.1.4數(shù)據分析實驗數(shù)據用SPSSVersion19.0軟件所有的數(shù)據首先進行方差同質性檢驗，然后進行單因素方差分析（one-wayANOVA），比較不同組織間的TO-GLTU2表達差異。如有顯著性差異(P<0.05)，則做Tukey多重比較，實驗數(shù)據用“平均數(shù)±標準差”表示。GLTU2mRNA水平以β-actin為內參，應用2-△△CT法確定mRNA的相對表達量。2.2實驗結果2.2.1核心片段通過簡并引物克隆得到卵形鯧鲹GLUT2的中間片段。卵形鯧鲹圖2-1卵形鯧鲹GLUT2中間片段電泳圖Fig.2-1TheresultofelectrophoresispatternofGLUT2coresequenceinTrachinotusovatus

廣東海洋大學碩士學位論文 2.2.3 GLUT2 蛋白跨膜結構和三級結構預測 軟件（TMHMM2.0）分析卵形鯧鲹 GLUT2 具有 12 個高度保守的跨膜結構域。

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]飼料蛋白質、糖脂比及鐵銅源對珍珠龍膽石斑魚幼魚營養(yǎng)生理功能的影響[D]. 郭鑫偉.廣東海洋大學 2019
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本文編號：3519125