為研究斑節(jié)對蝦（Penaeus monodon）耐氨氮的分子機制,本文利用RACE技術(shù)首次克隆了參與斑節(jié)對蝦氨氮應(yīng)激響應(yīng)的整合素β（PmItgb）基因及氨氮解毒代謝途徑上的Rh蛋白（Pm Rh）基因和鈉氫離子轉(zhuǎn)運體（Pm NHE）基因的cDNA全長,并對其進行了生物信息學(xué)分析。通過QPCR技術(shù)分析了三個基因在各組織中的分布、在96h急性氨氮脅迫下的表達變化模式,證明了其與氨氮脅迫存在相關(guān)性。本文對PmItgb在斑節(jié)對蝦的生長發(fā)育、蛻皮、先天免疫和氨氮誘導(dǎo)的細胞凋亡等幾個方面進行了探究。我們的研究結(jié)果在一定程度上表明PmItgb基因與氨氮脅迫所導(dǎo)致的生長發(fā)育緩慢及先天免疫系統(tǒng)功能下降等現(xiàn)象之間可能存在關(guān)聯(lián)。Pm Rh和Pm NHE基因是氨氮解毒代謝途徑的基因,本論文并利用RNAi技術(shù)探究了它們與氨轉(zhuǎn)運排泄其他相關(guān)基因之間的關(guān)系以及高氨氮環(huán)境下這兩個基因的沉默與死亡速率之間的關(guān)系。為研究Pm Rh基因和Pm NHE基因在斑節(jié)對蝦氨氮的解毒代謝過程中所起的作用奠定了基礎(chǔ)。斑節(jié)對蝦整合素β（PmItgb）基因的cDNA全長3011bp（Gen Bank associated NO:MK2643... 

【文章來源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

PmItgb核酸序列及理論氨基酸序列展示PmItgb(GenebankNo.MK264335)，啟動碼(ATG)和終止碼(TAA)用方形框出

上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文22圖2-2PmItgb與其他物種Itgb基因之間多重序列比對結(jié)果PmItgb基因的多重序列比對分析，(A)PmItgbcDNA推導(dǎo)的氨基酸序列與不同物種的多重比對。用于比對的序列包括：中國對蝦(AHH32890.1)、凡納濱對蝦(ADK56123.1)、太平洋對蝦(CAA67357.1)和中華絨螯蟹(AYX40719.1)。表示相似性的序列標(biāo)志顯示在比對的頂部，氨基酸的數(shù)量列在比對的右側(cè)。整合素β亞基結(jié)構(gòu)域、vonWillebrand因子A型結(jié)構(gòu)域、表皮生長因子樣結(jié)構(gòu)域和整合素B尾部分別用紅色、綠色、藍色和黃色下劃線突出顯示。Fig2-2DeducedaminoacidsequencealignmentofPmItgbtootherspeciesSequenceanalysisofPmItgbgene.MultiplealignmentofthededucedaminoacidsequenceofPmItgbcDNAwithvariousspecies.Sequencesusedforalignmentinclude:Fenneropenaeuschinensis(AHH32890.1),Litopenaeusvannamei(ADK56123.1),Pacifastacusleniusculus(CAA67357.1),Eriocheirsinensis(AYX40719.1).Sequencelogorepresentingthesimilarityisshownatthetopofalignmentsandnumbersofaminoacidarelistedontherightsideofalignments.Integrinbetasubunitsdomain,vonWillebrandfactorTypeAdomain,Epidermalgrowthfactor-likedomain,IntegrinBtaildomain,highlightedbyred,green,blue,andyellowunderline,respectively.圖2-3基于氨基酸序列比較的PmItgb在不同生物中的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig2-3ThephylogenetictreeofPmItgbindifferentorganismsbasedonaminoacidsequencecomparisons.

上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文233.3PmItgbmRNA在不同組織中的表達分析采用實時定量聚合酶鏈式反應(yīng)(qRT-PCR)檢測PmItgb在不同組織中的表達譜。結(jié)果如圖2-4所示，PmItgb轉(zhuǎn)錄本在血細胞、淋巴、腸、心臟、肝胰臟、鰓、肌肉、表皮、胃、腦、眼柄、卵巢和精巢等組織中均有表達，PmItgb在血細胞和淋巴中的mRNA表達水平特別高，在腸、心臟、肝胰腺和鰓中也有較高水平的表達。圖2-4PmItgb在各組織的相對表達量實時熒光定量PCR檢測PmItgb在斑節(jié)對蝦中的組織差異表達水平，EF-1α作為內(nèi)參基因進行對照，對于每個組織，數(shù)據(jù)顯示為三個獨立個體的平均值±SD(標(biāo)準差)。小寫字母不同表示各組之間具有顯著差異(P<0.05)。Fig2-4ExpressioncharacterizationofPmItgbinvarioustissuesasrevealedbyquantitativereal-timePCRfromhealthyshrimp.TheamountofPmItgbmRNAwasnormalizedtotheEF-1atranscriptlevel.Foreachtissue,dataareshownasmeans±SD(standarddeviation)ofthreeseparateindividuals.Barswithdifferentlettersweresignificantlydifferent(P<0.05).


本文編號：3512688