甲殼動物缺乏免疫球蛋白,需要依靠天然免疫抵御病原侵襲。血細胞在甲殼動物的免疫防御體系中扮演了重要的角色,螯蝦的血細胞可分為顆粒細胞（granulocytes,GC）,半顆粒細胞（semi-granulocytes,SGC）和透明細胞（hyalinocytes,HCs）三類亞群,GC與SGC是主要的細胞類型。目前,血細胞的各個類群在宿主免疫系統(tǒng)中承擔的功能還不甚明確。研究不同類群血細胞功能,首先要對不同細胞類群進行分離純化。本文建立了利用Percoll不連續(xù)密度梯度離心分離螯蝦血細胞的方法,并對配制分離體系的緩沖液以及分離體系的密度組成進行了優(yōu)化。結(jié)果發(fā)現(xiàn),由20%,65%和100%的Percoll組成的分離體系分離效果最優(yōu);經(jīng)過轉(zhuǎn)速為500×g離心20 min之后,可將螯蝦血細胞分為SGC與GC兩個細胞層,經(jīng)流式細胞術(shù)分析,發(fā)現(xiàn)細胞層純度均在95%以上,死亡細胞比例低于5%,可用于后續(xù)的細胞功能分析。目前認為,GC的顆粒中儲存了大量proPO,可通過脫顆粒作用釋放入血并參與宿主的免疫防御。SGC中也含有胞質(zhì)顆粒,然而SGC是否存在脫顆�，F(xiàn)象之前并無研究。本文將分離純化的SGC與GC分別... 

【文章來源】：自然資源部第三海洋研究所福建省

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

吞噬作用

proPO 系統(tǒng)反應(yīng)過程見圖 1 - 2。20 世紀末，Aspán 從螯蝦 Pacifastacus leniusculus 中相繼提純了 proPPPAE[36]。隨后，與 proPO 系統(tǒng)有關(guān)的蛋白分別被提純和鑒定，于是學者們光轉(zhuǎn)移到研究 proPO 系統(tǒng)的調(diào)控上。研究發(fā)現(xiàn)，proPO 系統(tǒng)可被少量的微分激活。SGC 的 proPO 系統(tǒng)可被 β-1,3-葡聚糖（β-1,3-glucans，BG）或者脂（lipopolysaccharides，LPS）激活，GC 的該系統(tǒng)可被 76kD 因子或者 β-1,糖結(jié)合蛋白（β-1,3-glucansbindingprotein，BGBP）激活。由于甲殼動物的主要儲存于 GC 的顆粒中，因此，76kD 因子和 BGBP 對甲殼動物 proPO 系釋放具有重要的調(diào)控作用。proPO 系統(tǒng)還會被加熱和組織的機械損傷激活[3系統(tǒng)的抑制則由血細胞內(nèi)的 proPO 抑制劑完成，如 α2-巨球蛋白、絲氨酸抑制劑等[35]，它們可以防止該系統(tǒng)的過度激活，保證機體的正常功能。

圖 2-1 WSSV 形態(tài)結(jié)構(gòu)示意圖a.完整病毒顆粒；b.核衣殼；c.病毒結(jié)構(gòu)示意圖資料來源：Van Etten, James L. Lesser Known Large dsDNAViruses. Springer, 2009.2.3 WSSV 的病理癥狀及組織病理學特征WSSV 是一種感染性強、致死率高的對蝦病毒，不僅可感染大部分養(yǎng)殖對蝦，還可感染幾種蟹和橈足動物[83]，此外，還發(fā)現(xiàn)一些昆蟲、�？�、浮游生物會攜帶WSSV[84]。感染 WSSV 后，病蝦頭胸甲和附肢會出現(xiàn)白斑，白斑多時連成一片，使甲殼變白。這些白斑可能是表皮細胞不正常的鈣鹽沉積[85]或者細胞分泌物的運輸途徑被破壞導致的[86]。也有某些甲殼動物宿主（如螯蝦），在感染 WSSV 后甲殼上不會出現(xiàn)白斑[87]。在感染 WSD 的早期階段，患病對蝦攝食減少，易昏睡，

【參考文獻】：
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本文編號：3497529