發(fā)布時間：2021-11-15 13:05

　　鰻弧菌感染鰻鱺、鱸魚、黃魚、鮭魚、香魚、大菱鲆、牙鲆、虹鱒、對蝦等廣大水產(chǎn)養(yǎng)殖生物,具有發(fā)病快,致死率高和流行廣泛特點(diǎn),給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成較大的危害,受到廣泛關(guān)注,成為研究熱點(diǎn)。制備鰻弧菌（SMW5）全菌滅活抗原,免疫新西蘭兔,制備兔抗多克隆抗體血清,其效價達(dá)1:320000;對鰻弧菌檢測靈敏度為1×104CFU/mL;與副溶血弧菌（ATC17802）、嗜水氣單胞菌（JS01-1）和類志賀鄰單胞菌（LCCi190625）有微弱的交叉反應(yīng);Western-Blot表明多克隆抗體與抗原的40 kDa蛋白有結(jié)合,與25-35 kDa的蛋白也有抗原抗體反應(yīng)。所制備的3株單克隆抗體,其中1H9效價好、抗體分泌穩(wěn)定、靈敏度高、特異性強(qiáng),可應(yīng)用于鰻弧菌ELISA或金標(biāo)試紙條的研制。以滅活鰻弧菌（SMW5）全菌為抗原,免疫Balb/c小鼠,應(yīng)用雜交瘤細(xì)胞融合技術(shù),制備鰻弧菌單克隆抗體:細(xì)胞融合率達(dá)94.6%,融合陽性率達(dá)到62.4%;篩選得到3株單克隆抗體分別命名為1H9、1C12、6F8,陽性細(xì)胞株培養(yǎng)上清的效價分別為 1:6400、1:3200、1:800,細(xì)胞亞類分別為 IgG2a、IgM、IgG... 

【文章來源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．１鰻弧菌形態(tài)??．．ｒｍｒｏ?ａｎｕａｒｕｍ??

圖１．２質(zhì)粒ｐＪＭｌ??Ｆｉｇ．１．２?Ｔｈｅ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｏｆ?ｐＪＭＩ??１型鰻弧菌不含質(zhì)粒，但毒性很強(qiáng)，其鐵吸收系茶酚胺鐵載體和兩種１ＲＯＭＰ。此種鐵載體與鰻表現(xiàn)，缺乏同源性。與大腸桿菌素作用相似。者［３３，３４］不排除這兩者之間存在進(jìn)化關(guān)系，但更產(chǎn)物（ＥＣＰ）具有溶血活性。溶血素為單一的動物致死性。鰻弧菌的溶血素可使鰻鱺致死，低于ＫＴＣ時溶解活性下降，最適作用溫度為２０血紅白為細(xì)菌提營養(yǎng)需要。??

３．３多克隆抗體的純化??將制備的鰻弧菌（ＳＭＴ５）多克隆抗體采用飽和硫酸銨溶液純化法純化。結(jié)??果如圖２．１所示。在１０？１５?ｋＤａ和４４？５５?ｋＤａ出現(xiàn)明顯的條帶。??Ｉ純化前?２純化后．?３ＰＭ??一?????－一Ｓ??；?！??圖２．１鰻弧菌０Ｓ７ＷＴＦ５）多克隆抗體的純化與ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電泳??Ｆｉｇ．２，１?Ｔｈｅ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ａｎｄ?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｐＡｂ?ｏｆ?Ｖ．ａｎｇｕｉｌｌａｒｕｍ?（ＳＭＷ５）??３．４多克隆抗體的效價檢測??３「ｉａｊ??２５．１??＼＼?■－多抗效價??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[7]鰻弧菌（Vibrio anguillarum）的病原生物學(xué)研究現(xiàn)狀（上）[J]. 孟思妤,孟長明,陳昌福.  漁業(yè)致富指南. 2010(01)
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博士論文
[1]鰻弧菌主要致病因子的研究[D]. 陳師勇.中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所） 2003

碩士論文
[1]抗哈維弧菌單克隆抗體的制備、特性分析與應(yīng)用[D]. 李洋.大連海洋大學(xué) 2014
[2]魚類病毒性出血性敗血癥病毒單克隆抗體的制備及其核蛋白基因的原核表達(dá)[D]. 杜娟.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]創(chuàng)傷弧菌膠體金免疫層析試紙條研制[D]. 嚴(yán)智敏.南方醫(yī)科大學(xué) 2011
[4]副溶血性弧菌特異性抗體的制備研究[D]. 翁仕強(qiáng).上海海洋大學(xué) 2011
[5]副溶血弧菌耐熱溶血毒素單克隆抗體的研究[D]. 張建.上海海洋大學(xué) 2011
[6]海水養(yǎng)殖魚類主要細(xì)菌病多聯(lián)疫苗的研制及應(yīng)用[D]. 劉斌.中國海洋大學(xué) 2007
[7]歐洲鰻鱺敗血癥病理學(xué)和組織化學(xué)的研究[D]. 卓玉琛.福建農(nóng)林大學(xué) 2007



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