大鯢（Andrias davidianus）屬兩棲綱有尾目隱鰓鯢科,為國(guó)家二級(jí)保護(hù)動(dòng)物,是兩棲綱動(dòng)物的最大物種,也是動(dòng)物進(jìn)化的“活化石”。大鯢屬肉食性動(dòng)物,食性主要為蛋白類食物。大鯢的生長(zhǎng)發(fā)育及攝食種類受季節(jié)性影響較大,大鯢是兩棲綱與爬行綱的過渡類群,其消化道結(jié)構(gòu)復(fù)雜,腸道微生物組成多樣。研究大鯢腸道微生物多樣性及產(chǎn)酶活性不僅可以給野生大鯢保護(hù)提供依據(jù),也可以為大鯢人工化養(yǎng)殖預(yù)防病害提供依據(jù)。本論文研究以野生大鯢與養(yǎng)殖大鯢兩種樣品為實(shí)驗(yàn)材料,通過微生物純培養(yǎng)技術(shù)與免培養(yǎng)技術(shù)全面的分析兩類生境下的大鯢腸道微生物的組成與群落多樣性分析;通過微生物胞外酶研究方法對(duì)兩種樣品進(jìn)行腸道細(xì)菌產(chǎn)胞外酶篩選。野生大鯢腸道微生物多樣性及產(chǎn)酶活性分析采用純培養(yǎng)技術(shù)分離野生大鯢腸道細(xì)菌,選用引物27F/1492R擴(kuò)增后進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定。結(jié)果表明,野生大鯢分離到的86株腸道細(xì)菌可劃分為2個(gè)門6個(gè)屬,變形菌門（Proteobacteria,80.23%）:羅維登斯菌屬,愛德華氏菌屬,檸檬酸桿菌屬;厚壁菌門（Firmicutes,19.77%）:漫游球菌屬,芽孢桿菌屬,賴氨酸芽孢菌屬。應(yīng)用胞外酶培養(yǎng)基篩選野生大鯢... 

【文章來(lái)源】：陜西理工大學(xué)陜西省

【文章頁(yè)數(shù)】：89 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 大鯢
    1.2 大鯢研究現(xiàn)狀
    1.3 腸道微生物研究現(xiàn)狀
    1.4 腸道細(xì)菌
    1.5 古菌研究
    1.6 微生物胞外酶
    1.7 純培養(yǎng)技術(shù)
    1.8 免培養(yǎng)技術(shù)
第2章 野生大鯢腸道細(xì)菌多樣性及產(chǎn)酶活性分析
    2.1 材料與儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 野生大鯢腸道細(xì)菌純培養(yǎng)多樣性
            2.2.1.1 腸道細(xì)菌分離培養(yǎng)
            2.2.1.2 腸道細(xì)菌 16S rRNA擴(kuò)增
            2.2.1.3 腸道細(xì)菌 16S rRNA分子鑒定
        2.2.2 野生大鯢腸道細(xì)菌純培養(yǎng)產(chǎn)酶活性
        2.2.3 野生大鯢腸道細(xì)菌免培養(yǎng)多樣性
            2.2.3.1 腸道細(xì)菌總DNA提取
            2.2.3.2 腸道細(xì)菌總DNA的 16S rRNA擴(kuò)增
            2.2.3.3 大腸桿菌感受態(tài)DH5α 細(xì)胞制備及轉(zhuǎn)化
            2.2.3.4 陽(yáng)性克隆子篩選及鑒定
        2.2.4 野生大鯢腸道古菌免培養(yǎng)多樣性
            2.2.4.1 腸道古菌總DNA提取
            2.2.4.2 腸道古菌總DNA的 16S rRNA擴(kuò)增
            2.2.4.3 陽(yáng)性克隆子篩選及鑒定
    2.3 結(jié)果和分析
        2.3.1 野生大鯢腸道細(xì)菌純培養(yǎng)多樣性結(jié)果
            2.3.1.1 腸道細(xì)菌分離結(jié)果
            2.3.1.2 腸道細(xì)菌 16S rRNA擴(kuò)增結(jié)果
            2.3.1.3 腸道細(xì)菌 16S rRNA測(cè)序結(jié)果及系統(tǒng)發(fā)育構(gòu)建
        2.3.2 野生大鯢腸道細(xì)菌純培養(yǎng)產(chǎn)酶活性結(jié)果
        2.3.3 野生大鯢腸道細(xì)菌免培養(yǎng)多樣性結(jié)果
            2.3.3.1 腸道細(xì)菌總DNA提取結(jié)果
            2.3.3.2 腸道細(xì)菌總DNA的 16S rRNA擴(kuò)增結(jié)果
            2.3.3.3 大腸桿菌感受態(tài)DH5α 轉(zhuǎn)化結(jié)果
            2.3.3.4 陽(yáng)性克隆鑒定結(jié)果及系統(tǒng)發(fā)育構(gòu)建
        2.3.4 野生大鯢腸道古菌免培養(yǎng)多樣性結(jié)果
            2.3.4.1 腸道古菌總DNA提取結(jié)果
            2.3.4.2 腸道古菌總DNA的 16S rRNA擴(kuò)增結(jié)果
            2.3.4.3 陽(yáng)性克隆鑒定結(jié)果及系統(tǒng)發(fā)育構(gòu)建
    2.4 小結(jié)與討論
第3章 人工養(yǎng)殖大鯢腸道細(xì)菌多樣性及產(chǎn)酶活性分析
    3.1 材料與儀器
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.3 試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 養(yǎng)殖大鯢腸道細(xì)菌純培養(yǎng)多樣性
            3.2.1.1 腸道細(xì)菌分離培養(yǎng)
            3.2.1.2 腸道細(xì)菌 16S rRNA擴(kuò)增
            3.2.1.3 腸道細(xì)菌 16S rRNA分子鑒定
        3.2.2 養(yǎng)殖大鯢腸道細(xì)菌純培養(yǎng)產(chǎn)酶活性
        3.2.3 養(yǎng)殖大鯢腸道細(xì)菌免培養(yǎng)多樣性
            3.2.3.1 腸道細(xì)菌總DNA提取
            3.2.3.2 腸道細(xì)菌總DNA的 16S rRNA擴(kuò)增
            3.2.3.3 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化
            3.2.3.4 陽(yáng)性克隆子篩選及鑒定
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 養(yǎng)殖大鯢腸道細(xì)菌純培養(yǎng)多樣性結(jié)果
            3.3.1.1 腸道細(xì)菌分離培養(yǎng)結(jié)果
            3.3.1.2 腸道細(xì)菌 16S rRNA擴(kuò)增結(jié)果
            3.3.1.3 腸道細(xì)菌 16S rRNA測(cè)序結(jié)果及系統(tǒng)發(fā)育構(gòu)建
        3.3.2 養(yǎng)殖大鯢腸道細(xì)菌純培養(yǎng)產(chǎn)酶活性結(jié)果
        3.3.3 養(yǎng)殖大鯢腸道細(xì)菌免培養(yǎng)多樣性結(jié)果
            3.3.3.1 腸道細(xì)菌總DNA提取結(jié)果
            3.3.3.2 大腸桿菌感受態(tài)DH5α 轉(zhuǎn)化結(jié)果
            3.3.3.3 腸道細(xì)菌總DNA的 16S rRNA擴(kuò)增結(jié)果
            3.3.3.4 陽(yáng)性克隆鑒定結(jié)果及系統(tǒng)發(fā)育構(gòu)建
    3.4 小結(jié)與討論
總結(jié)與討論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間學(xué)術(shù)成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]微生物非培養(yǎng)技術(shù)在環(huán)境微生物領(lǐng)域的研究進(jìn)展[J]. 梅冰,陸翔,王永喬,王靜,張瑞,李顯秋.  化學(xué)工程師. 2015(10)
[3]產(chǎn)蛋白酶嗜熱菌Anoxybacillus sp.紫外誘變研究[J]. 應(yīng)長(zhǎng)青,洪心,李旭穎,鄭宸,尹凡碩,謝輝,韓松,秦博.  哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(05)
[4]嗜熱鏈球菌關(guān)鍵生產(chǎn)特性分子水平的研究進(jìn)展[J]. 趙春雨,崔艷華,曲曉軍,俞婷,張春玲.  中國(guó)乳品工業(yè). 2015(10)
[5]脂肪酶的制備及其在皮革工業(yè)中的應(yīng)用[J]. 周秀軍,周利芳,周建民,隋喜龍.  西部皮革. 2015(20)
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[7]紅鰭東方鲀稚魚腸道可培養(yǎng)細(xì)菌的多樣性[J]. 李艷宇,任盟,張叢堯,王連順,朱瑩,馬悅欣.  水產(chǎn)科學(xué). 2015(10)
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[9]基于16S rRNA基因序列分析家蠶腸道細(xì)菌的多樣性[J]. 許剛,孫振麗,胡小龍,薛仁宇,曹廣力,貢成良.  蠶業(yè)科學(xué). 2015(04)
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博士論文
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碩士論文
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[7]飼喂不同纖維分解菌對(duì)鵝腸道菌群多樣性的影響[D]. 馬鳳蓮.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[8]羊胚胎胃腸道細(xì)菌分離與鑒定[D]. 于超.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[9]陜西省太白縣大鯢資源調(diào)查及其變動(dòng)情況分析[D]. 王啟軍.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2012
[10]幾種常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與人腸道主要菌群多樣性比較[D]. 李偉.西南大學(xué) 2011



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