為分析天津地區(qū)養(yǎng)殖凡納濱對蝦Litopenaeus vannamei暴發(fā)性死亡的原因,采用生理生化法、16S rRNA基因序列分析及AP4套式PCR方法對從患病凡納濱對蝦（體長5～6 cm）肝胰腺中分離得到的優(yōu)勢菌VP0630進(jìn)行了病原菌分離鑒定和致病性研究,采用注射感染法對凡納濱對蝦進(jìn)行攻毒試驗(yàn),試驗(yàn)設(shè)對照組和感染組,每組設(shè)3個(gè)平行,每個(gè)平行各30尾對蝦,感染組每尾蝦注射3×10⁷ CFU/mL的副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus 25μL,分別于注射后3、6、9、12、24、48、72、96 h時(shí),檢測凡納濱對蝦體內(nèi)免疫酶活力的變化情況。結(jié)果表明:經(jīng)鑒定,優(yōu)勢菌株VP0630屬于致病性副溶血弧菌,理化特性鑒定概率為99%,pir毒力基因檢測呈陽性;注射感染試驗(yàn)顯示,對蝦96 h時(shí)的累積死亡率達(dá)78.37%;酶活力檢測顯示,對照組對蝦血清和肝胰腺中溶菌酶（LYS）、酚氧化酶（PO）、超氧化物歧化酶（SOD）、堿性磷酸酶（ALP）、酸性磷酸酶（ACP）和總抗氧化能力（T-AOC）6種酶活力在0～96 h時(shí)無顯著性變化（P>0.05）,而... 

【文章來源】：大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,35(04)北大核心CSCD

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VP0630菌株AP4 PCR擴(kuò)增結(jié)果

為研究菌株VP0630的致病性,利用AP4套式PCR方法對分離菌株進(jìn)一步開展毒力基因pir檢測,檢測結(jié)果如圖2所示。套式PCR結(jié)果顯示,兩輪擴(kuò)增產(chǎn)物均為陽性,表明菌株VP0630為致病性副溶血弧菌。2.2 人工感染試驗(yàn)

從表3可見:對照組血清中6種酶活力在3～96 h時(shí)無顯著性差異(P>0.05),感染組6種酶活力均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢;感染組LYS和T-AOC酶活力在12 h時(shí)達(dá)到最高, 96 h時(shí)酶活力降到最低且與對照組無顯著性差異(P>0.05);感染組ALP酶活力在12 h時(shí)達(dá)到最高,72 h時(shí)酶活力降到最低且與對照組無顯著性差異(P>0.05);感染組ACP酶活力在9 h時(shí)達(dá)到最高,96 h時(shí)降到最低且顯著低于對照組水平(P<0.05);SOD和PO酶活力在6 h時(shí)達(dá)到最高,之后逐漸降低,96 h時(shí)降到最低且與對照組無顯著性差異(P>0.05)。表3 注射副溶血弧菌后凡納濱對蝦血清中6種酶活力的變化Tab.3 Change in activities of six enzymes in serum of Pacific white leg shrimp Litopenaeus vannamei challenged with Vibrio parahaemolyticus 組別group 時(shí)間/htime 溶菌酶/(U·L-1)LYS 堿性磷酸酶/(U·L-1)ALP 酸性磷酸酶/(U·L-1)ACP 超氧化物酶/(U·mL-1)SOD 酚氧化物酶/(U·L-1)PO 總抗氧化能力/(U·mL-1)T-AOC 對照組control group 3 4.04±0.17g 48.00±1.17e 7.55±0.20bc 132.07±3.42c 26.09±1.09c 14.25±0.35e 6 4.00±0.15g 47.68±1.79e 7.70±0.25bc 131.00±4.24c 26.11±1.17c 14.85±0.21e 9 4.07±0.15g 49.12±0.99e 7.65±0.30bc 133.07±3.07c 25.75±1.95c 14.65±0.17e 12 4.06±0.10g 49.50±1.05 e 7.60±0.15bc 131.57±3.50c 26.55±1.05c 14.69±0.21e 24 4.06±0.12g 49.09±1.21e 7.50±0.15bc 130.07±2.97c 26.47±1.11c 14.35±0.35e 48 4.08±0.16g 49.28±1.27e 7.45±0.17bc 131.67±3.21c 25.11±1.47c 14.45±0.27e 72 4.05±0.13g 47.68±1.71e 7.52±0.22bc 130.07±3.57c 26.61±0.97c 14.52±0.32e 96 3.98±0.19g 49.08±1.06e 7.48±0.18bc 129.07±4.21c 26.21±1.09c 14.50±0.31e 感染組infected group 3 5.18±0.32de 60.68±3.39cd 7.84±0.47b 142.40±8.26bc 25.95±2.22c 19.10±1.00bc 6 5.96±0.21bc 64.56±2.22bc 9.27±0.31a 162.13±5.41a 34.79±2.06a 19.60±0.65abc 9 6.42±0.20ab 70.01±2.14ab 10.09±0.30a 150.01±5.22ab 34.65±1.40a 20.43±0.63ab 12 6.70±0.30a 72.40±3.14a 10.04±0.43a 158.32±7.65ab 33.38±1.45a 21.51±0.92a 24 5.54±0.21cd 64.33±2.22bc 8.26±0.31b 148.28±5.41ab 31.07±1.45ab 17.93±0.63cd 48 4.76±0.22ef 59.21±2.30cd 6.80±0.32cd 145.17±5.61ab 28.24±1.51bc 16.14±0.68de 72 4.18±0.21fg 51.34±2.22e 6.22±0.31de 140.66±5.41bc 24.91±1.45c 15.57±0.65e 96 4.01±0.20g 55.41±2.14de 5.67±0.30e 129.86±5.22c 23.33±1.40c 15.72±0.63e 注:同列中標(biāo)有不同字母者表示組間有顯著性差異(P<0.05),標(biāo)有相同字母者表示組間無顯著性差異(P>0.05),下同Note:The means with different letters within the same column are significantly different in the groups at the 0.05 probability level, and the means with the same letter within the same column are not significant differences, et sequentia

【參考文獻(xiàn)】：
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