半滑舌鰨源美人魚發(fā)光桿菌的分離鑒定及致病性研究
發(fā)布時間：2021-11-10 23:02
探究引起半滑舌鰨（Cynoglossus semilaevis Gunther）發(fā)病死亡的原因及其病原菌的藥敏特性,為生產(chǎn)中有效防治該病提供理論依據(jù)。于2018年從天津市某養(yǎng)殖場患病半滑舌鰨中分離得到3株優(yōu)勢菌,回歸感染實驗證實菌株P(guān)SC0601對半滑舌鰨具有致病性。通過肉眼觀察可見半滑舌鰨腹腔嚴重腫脹,腹部兩側(cè)肌肉出血,解剖后可見半滑舌鰨腸道、肝臟等組織器官亦有大量出血。經(jīng)API鑒定系統(tǒng)和16S rDNA序列分析鑒定該菌株為美人魚發(fā)光桿菌美人魚亞種（Photobacterium damselae subsp.damselae）。該菌在綿羊血平板上呈現(xiàn)β型溶血,人工回歸感染實驗結(jié)果顯示該菌對半滑舌鰨的半數(shù)致死量(LD50)為1.5×104 CFU/g。對48種抗菌藥物的藥敏實驗結(jié)果表明,菌株P(guān)SC0601對氟苯尼考、氯霉素、阿莫西林、阿奇霉素、壯觀霉素、頭孢哌酮等20種藥物具有較高敏感性。研究結(jié)果表明,美人魚發(fā)光桿菌美人魚亞種對半滑舌鰨具有較強致病性,可導(dǎo)致肝臟、腸道等器官發(fā)生出血性壞死,引發(fā)魚類死亡。本文通過對該菌的藥物敏感性進行研究,以期...
【文章來源】：中國海洋大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2020,50(06)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】：8 頁
【部分圖文】：
PSC0601菌株革蘭氏染色
分別從患病半滑舌鰨肝臟和腸道分離得到3株優(yōu)勢菌, 經(jīng)過人工感染預(yù)試驗證實其中優(yōu)勢菌PSC0601為致病菌,其他2株菌PSC0602、PSC0603均不致病。在2216E瓊脂平板上25 ℃培養(yǎng) 24 h后, PSC0601菌株的菌落為圓形, 乳白色, 表面光滑濕潤, 邊緣光滑, 菌落直徑 1～2 mm。病原菌在綿羊血平板上呈現(xiàn)典型的 β 型溶血(見圖1),病原菌進行革蘭氏染色,在鏡下觀察,呈球桿狀革蘭氏陰性菌(見圖2箭頭所示)。圖2 PSC0601菌株革蘭氏染色
采用通用引物擴增所分離菌株的 16S rDNA 基因,測序結(jié)果經(jīng)過去除載體序列和拼接后,PSC0601菌株16S rDNA 基因的片段為1 454 bp,在NCBI數(shù)據(jù)庫中進行Blast比對,結(jié)果顯示PSC0601菌株與美人魚發(fā)光桿菌的同源性最高,均都達到99%,所以不能以此直接區(qū)分PSC0601菌株為美人魚亞種或殺魚亞種,還要通過生理生化特性進行分析才能確定其為美人魚亞種或殺魚亞種。在GenBank 數(shù)據(jù)庫中選取同源性較高的美人魚桿菌菌株和不同親緣關(guān)系的菌株的16S rDNA序列,利用 MEGA 7.0 軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(見圖3),進行系統(tǒng)進化分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)PSC0601菌株與美人魚發(fā)光桿菌的2個亞種處為同一分支,進一步證明PSC0601菌株為美人魚發(fā)光桿菌。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Isolation and Identification of Photobacterium damselae subsp.damselae（PDD） from Tongue Sole[J]. Yang Nan,Zhang Zhiqiang,Wu Tonglei,Zhu Jianxin,Fu Yanfang,Han Hongsheng,Wang Hongbin,Shi Qiumei,Gao Guisheng. Animal Husbandry and Feed Science. 2018(02)
[2]中草藥對美人魚發(fā)光桿菌的體外抑菌試驗[J]. 王洪彬,李永慧,吳同壘,張召興,張志強,高桂生,史秋梅. 黑龍江畜牧獸醫(yī). 2018(06)
[3]大菱鲆源美人魚發(fā)光桿菌殺魚亞種的分離鑒定[J]. 吳同壘,張志強,李巧玲,潘曉藝,張艷英,高桂生,史秋梅. 中國獸醫(yī)學(xué)報. 2018(02)
[4]卵形鯧鲹Tf、TNFα和C-Lys的組織分布及對美人魚發(fā)光桿菌感染的響應(yīng)[J]. 宋沙沙,馬紅玲,馮娟,蘇友祿,程長洪,郭志勛. 南方水產(chǎn)科學(xué). 2017(02)
[5]條石鯛（Oplegnathus fasciatus）源美人魚發(fā)光桿菌殺魚亞種（Photobacterium damselae subsp.piscicida）的分離鑒定[J]. 王庚申,許文軍,謝建軍,汪瑋,施慧. 漁業(yè)科學(xué)進展. 2017(02)
[6]細菌rDNA分類鑒定的方法學(xué)研究[J]. 魯辛辛,黃艷飛,田曉波. 中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志. 2006(05)
本文編號：3488112
【文章來源】：中國海洋大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2020,50(06)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】：8 頁
【部分圖文】：
PSC0601菌株革蘭氏染色
分別從患病半滑舌鰨肝臟和腸道分離得到3株優(yōu)勢菌, 經(jīng)過人工感染預(yù)試驗證實其中優(yōu)勢菌PSC0601為致病菌,其他2株菌PSC0602、PSC0603均不致病。在2216E瓊脂平板上25 ℃培養(yǎng) 24 h后, PSC0601菌株的菌落為圓形, 乳白色, 表面光滑濕潤, 邊緣光滑, 菌落直徑 1～2 mm。病原菌在綿羊血平板上呈現(xiàn)典型的 β 型溶血(見圖1),病原菌進行革蘭氏染色,在鏡下觀察,呈球桿狀革蘭氏陰性菌(見圖2箭頭所示)。圖2 PSC0601菌株革蘭氏染色
采用通用引物擴增所分離菌株的 16S rDNA 基因,測序結(jié)果經(jīng)過去除載體序列和拼接后,PSC0601菌株16S rDNA 基因的片段為1 454 bp,在NCBI數(shù)據(jù)庫中進行Blast比對,結(jié)果顯示PSC0601菌株與美人魚發(fā)光桿菌的同源性最高,均都達到99%,所以不能以此直接區(qū)分PSC0601菌株為美人魚亞種或殺魚亞種,還要通過生理生化特性進行分析才能確定其為美人魚亞種或殺魚亞種。在GenBank 數(shù)據(jù)庫中選取同源性較高的美人魚桿菌菌株和不同親緣關(guān)系的菌株的16S rDNA序列,利用 MEGA 7.0 軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(見圖3),進行系統(tǒng)進化分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)PSC0601菌株與美人魚發(fā)光桿菌的2個亞種處為同一分支,進一步證明PSC0601菌株為美人魚發(fā)光桿菌。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Isolation and Identification of Photobacterium damselae subsp.damselae（PDD） from Tongue Sole[J]. Yang Nan,Zhang Zhiqiang,Wu Tonglei,Zhu Jianxin,Fu Yanfang,Han Hongsheng,Wang Hongbin,Shi Qiumei,Gao Guisheng. Animal Husbandry and Feed Science. 2018(02)
[2]中草藥對美人魚發(fā)光桿菌的體外抑菌試驗[J]. 王洪彬,李永慧,吳同壘,張召興,張志強,高桂生,史秋梅. 黑龍江畜牧獸醫(yī). 2018(06)
[3]大菱鲆源美人魚發(fā)光桿菌殺魚亞種的分離鑒定[J]. 吳同壘,張志強,李巧玲,潘曉藝,張艷英,高桂生,史秋梅. 中國獸醫(yī)學(xué)報. 2018(02)
[4]卵形鯧鲹Tf、TNFα和C-Lys的組織分布及對美人魚發(fā)光桿菌感染的響應(yīng)[J]. 宋沙沙,馬紅玲,馮娟,蘇友祿,程長洪,郭志勛. 南方水產(chǎn)科學(xué). 2017(02)
[5]條石鯛（Oplegnathus fasciatus）源美人魚發(fā)光桿菌殺魚亞種（Photobacterium damselae subsp.piscicida）的分離鑒定[J]. 王庚申,許文軍,謝建軍,汪瑋,施慧. 漁業(yè)科學(xué)進展. 2017(02)
[6]細菌rDNA分類鑒定的方法學(xué)研究[J]. 魯辛辛,黃艷飛,田曉波. 中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志. 2006(05)
本文編號：3488112
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