水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)是全球食物生產(chǎn)增長最快的系統(tǒng)之一，但是病害頻發(fā)阻礙了其進一步健康地發(fā)展。目前，抗生素是公認的治療細菌性疾病的有效方法�？股氐臑E用使藥物殘留問題嚴(yán)重，并進一步加快了細菌抗藥性的出現(xiàn)。密度感應(yīng)（quorum sensing, QS）是微生物之間的一種交流機制，用于調(diào)控基因的表達以及協(xié)調(diào)微生物的群體性行為，如生物被膜的形成、生物發(fā)光和毒力因子的分泌等。研究發(fā)現(xiàn)在多種致病菌中，致病因子的分泌和QS密切相關(guān)�？股氐臑E用使得細菌抗藥性問題越來越嚴(yán)重。由于QS不是微生物生存所必需的，因此淬滅致病菌的密度感應(yīng)系統(tǒng)（quorum quenching, QQ）可以在不殺死細菌的情況下大大地降低其毒力因子的表達，同時降低環(huán)境中的選擇壓力和出現(xiàn)細菌抗藥性的幾率，因此密度感應(yīng)淬滅技術(shù)是一種極具開發(fā)前景的細菌性病害的控制手段。相關(guān)研究表明海洋中蘊含著豐富的QQ酶資源，而目前發(fā)現(xiàn)的QQ活性物質(zhì)特別是QQ酶主要來源于陸地微生物。本論文建立了一種高通量的QQ菌株篩選方法，從牙鲆體內(nèi)及養(yǎng)殖環(huán)境中分離篩選土著QQ菌株，對具有強QQ活性的耐油具柄菌（Muricauda olearia）Th120的QQ活性物質(zhì)進... 

【文章來源】：中國海洋大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：147 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1 細菌性疾病的治療手段
    2 微生物的密度感應(yīng)系統(tǒng)及其種類
        2.1 AHL 信號分子的結(jié)構(gòu)與特性
        2.2 QS 系統(tǒng)的同一性和多樣性
    3 天然密度感應(yīng)淬滅物質(zhì)
        3.1 小分子 QS 阻抑物
            3.1.1 海洋來源的 AHL 類 QS 小分子阻抑物
            3.1.2 陸地來源的 AHL 類 QS 小分子阻抑物
            3.1.3 抑制其他 QS 系統(tǒng)的天然化合物
        3.2 大分子密度感應(yīng)淬滅物質(zhì)
            3.2.1 AHL 內(nèi)酯酶
            3.2.2 AHL �；D(zhuǎn)移酶
            3.2.3 AHL 氧化還原酶
    4 海洋來源的密度感應(yīng)淬滅細菌
    5 本論文的研究目的和意義
第二章 密度感應(yīng)淬滅菌株高通量篩選方法
    1 材料與方法
        1.1 報告菌株
        1.2 N-酰基高絲氨酸內(nèi)酯（N-acylhomoserine lactones, AHLs）
        1.3 高通量 QQ 菌株篩選方法概述
        1.4 高通量 QQ 菌株篩選方法校正系數(shù)的測定及優(yōu)化
        1.5 高通量 QQ 菌株篩選方法與傳統(tǒng) ONPG 法的比較
        1.6 高通量 QQ 菌株篩選方法的應(yīng)用
        1.7 QQ 菌株 AHL 降解特性的進一步檢測
        1.8 QQ 菌株對斑馬魚的致病性以及保護能力
    2 結(jié)果
        2.1 高通量 QQ 菌株篩選方法校正系數(shù)的測定
        2.2 高通量 QQ 菌株篩選方法的優(yōu)化
        2.3 高通量 QQ 菌株篩選方法的最終流程
        2.4 高通量 QQ 菌株篩選方法與傳統(tǒng) ONPG 法的比較
        2.5 QQ 菌株的高通量篩選
        2.6 QQ 菌株 AHL 降解特性的進一步研究
        2.7 QQ 菌株對斑馬魚的保護效果
    3 討論
    4 小結(jié)
第三章 耐油具柄菌 (Muricauda olearia) Th120 的密度感應(yīng)淬滅活性分析
    1 材料與方法
        1.1 菌株與質(zhì)粒
        1.2 AHL 降解活性的檢測方法概述
        1.3 菌株 Th120 的小分子物質(zhì)的提取、初步純化與檢測
        1.4 菌株 Th120 胞外產(chǎn)物和細胞內(nèi)含物的制備
        1.5 菌株 Th120 胞外產(chǎn)物中蛋白的初步分離
        1.6 內(nèi)酯酶活性的初步檢測：酸化法
        1.7 膠內(nèi) QQ 活性檢測
        1.8 菌株 Th120 的全基因組測序
        1.9 膠內(nèi) QQ 活性蛋白條帶的質(zhì)譜檢測
        1.10 菌株 Th120 重組 QQ 酶的表達與純化
        1.11 HPLC 和 ESI-MS 檢測 MomL 的 AHL 降解產(chǎn)物
        1.12 重組 MomL 酶學(xué)動力學(xué)參數(shù)的測定
        1.13 重組 MomL 的 AHL 降解特性的測定
            1.13.1 MomL 的最適反應(yīng)溫度和溫度穩(wěn)定性
            1.13.2 EDTA 及金屬離子對酶活的影響
        1.14 重組 MomL 金屬含量的測定
        1.15 MomL 的定點突變
        1.16 重組 MomL 對致病菌毒力因子分泌的影響
    2 結(jié)果
        2.1 QQ 活性檢測方法的使用策略
        2.2 耐油具柄菌 Th120 的 QQ 活性組分分析
        2.3 菌株 Th120 的小分子 QS 抑制物以及胞外蛋白的初步分離純化
        2.4 菌株 Th120 胞外和胞內(nèi)蛋白的膠內(nèi)活性檢測
        2.5 菌株 Th120 的全基因組測序及其膠內(nèi)活性蛋白條帶的質(zhì)譜檢測
        2.6 重組 AHL 降解酶的異源表達及其活性驗證
        2.7 QQ 酶的氨基酸序列分析
        2.8 QQ 酶的 AHL 降解特性
            2.8.1 QQ 酶 MomL 和 MomA 的降解機制
            2.8.2 MomL 的酶學(xué)動力學(xué)參數(shù)測定
            2.8.3 MomL 降解速率受溫度、pH、EDTA 以及金屬離子的影響
            2.8.4 MomL 的金屬含量及其活性的關(guān)系
        2.9 MomL 的定點突變
        2.10 體外實驗評估 MomL 對致病菌毒力因子的降低能力
    3 討論
        3.1 MomL 代表一類新型海洋 AHL 內(nèi)酯酶
        3.2 膠內(nèi) QQ 活性檢測方法及結(jié)果
        3.3 QQ 活性物質(zhì)：微生物進化出的生存策略？
    4 小結(jié)
第四章 耐油具柄菌的全基因組測序、QQ 酶同源蛋白預(yù)測及調(diào)控分析
    1 材料與方法
        1.1 菌株與質(zhì)粒
        1.2 胞外產(chǎn)物和細胞內(nèi)含物的 AHL 降解活性的檢測方法
        1.3 菌株 Th120 基因組測序和組裝
        1.4 菌株 Th120 及其基因組注釋分析
    2 結(jié)果與討論
        2.1 菌株 Th120 基因組的一般特征及與其他代表性菌株基因組的比較
        2.2 黃桿菌科細菌的 QQ 酶預(yù)測
        2.3 MomL 的生理學(xué)功能及調(diào)控表達的生物信息學(xué)分析
    3 小結(jié)
第五章 結(jié)論
    1 全文總結(jié)
    2 主要創(chuàng)新點
參考文獻
附錄
致謝
個人簡歷
已發(fā)表的學(xué)術(shù)成果



本文編號：3487934