對蝦白斑綜合征病毒（WSSV）是對對蝦養(yǎng)殖業(yè)產(chǎn)生巨大危害的病毒，目前還未發(fā)現(xiàn)有效的治療措施。為了尋找對該病毒的有效防控方法，本文構(gòu)建了三種含VP28的融合蛋白并研究其對凡納濱對蝦的保護(hù)作用，在最后一節(jié)內(nèi)容中，克隆了與WSSV感染過程相關(guān)的F0-ATP合酶序列的全長，以上研究為后續(xù)實驗的開展提供基礎(chǔ)。1.針對VP28C和Hsp70p這兩段目的基因，設(shè)計引物，經(jīng)過PCR擴(kuò)增分別得到了目的基因，經(jīng)雙酶切和連接反應(yīng)，成功的將這兩個片段克隆至載體pBAD/gⅢA中。通過轉(zhuǎn)化反應(yīng)，將構(gòu)建的重組載體導(dǎo)入到感受態(tài)細(xì)胞Top10中。將大腸桿菌進(jìn)行大量的培養(yǎng)后，添加一定濃度的誘導(dǎo)劑，使構(gòu)建的融合蛋白在大腸桿菌內(nèi)得到了成功的表達(dá)，利用SDS-PAGE和Western-blot對表達(dá)的蛋白進(jìn)行了驗證。通過Co2+親和層析和超濾技術(shù)獲得純化的目的蛋白獲得了濃度較高的純化蛋白。通過肌肉注射的方式將蛋白注射到對蝦體內(nèi)，采用病料投喂方式進(jìn)行凡納濱對蝦感染，結(jié)果表明，構(gòu)建的融合蛋白對對蝦有一定的保護(hù)作用。通過熒光定量實驗，檢測了對蝦體內(nèi)與免疫反應(yīng)相關(guān)的幾種基因的表達(dá)量的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，注射蛋白的對蝦組與對照組相比，其免... 

【文章來源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組載體pBAD/gIIIA-vp28c菌落PCR鑒定M:DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)DL2000;1:空白對照;2:菌落PCR鑒定VP28C

體 pBAD/gIIIA-Hsp70pL2000；1：空白對照；tion of pBAD/gIIIA-Hsp7000；Lane 1：control；L載體 pBAD/gIIIA-vp28C1：空白對照；2~3：pBPCR 鑒定 of pBAD/gIIIA-vp28C-H

組載體 pBAD/gIIIA-vp28C1：空白對照；2~3：pBAPCR 鑒定n of pBAD/gIIIA-vp28C-Hs000；Lane 1：control；Lavp28C-Hsp70p 的表達(dá)時間的菌液在誘導(dǎo)表達(dá)完后進(jìn)行 SDS-PAGE 電泳，表達(dá)蛋白（圖 1-4）,與理

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]WSSV-VP90、VP39與WSSV及宿主蛋白的作用[D]. 李倩.上海海洋大學(xué) 2012



本文編號：3481908