對蝦白斑綜合征病毒（WSSV）是對對蝦養(yǎng)殖業(yè)產(chǎn)生巨大危害的病毒，目前還未發(fā)現(xiàn)有效的治療措施。為了尋找對該病毒的有效防控方法，本文構建了三種含VP28的融合蛋白并研究其對凡納濱對蝦的保護作用，在最后一節(jié)內(nèi)容中，克隆了與WSSV感染過程相關的F0-ATP合酶序列的全長，以上研究為后續(xù)實驗的開展提供基礎。1.針對VP28C和Hsp70p這兩段目的基因，設計引物，經(jīng)過PCR擴增分別得到了目的基因，經(jīng)雙酶切和連接反應，成功的將這兩個片段克隆至載體pBAD/gⅢA中。通過轉(zhuǎn)化反應，將構建的重組載體導入到感受態(tài)細胞Top10中。將大腸桿菌進行大量的培養(yǎng)后，添加一定濃度的誘導劑，使構建的融合蛋白在大腸桿菌內(nèi)得到了成功的表達，利用SDS-PAGE和Western-blot對表達的蛋白進行了驗證。通過Co2+親和層析和超濾技術獲得純化的目的蛋白獲得了濃度較高的純化蛋白。通過肌肉注射的方式將蛋白注射到對蝦體內(nèi)，采用病料投喂方式進行凡納濱對蝦感染，結(jié)果表明，構建的融合蛋白對對蝦有一定的保護作用。通過熒光定量實驗，檢測了對蝦體內(nèi)與免疫反應相關的幾種基因的表達量的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，注射蛋白的對蝦組與對照組相比，其免... 

【文章來源】：上海海洋大學上海市

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組載體pBAD/gIIIA-vp28c菌落PCR鑒定M:DNA分子量標準DL2000;1:空白對照;2:菌落PCR鑒定VP28C

體 pBAD/gIIIA-Hsp70pL2000；1：空白對照；tion of pBAD/gIIIA-Hsp7000；Lane 1：control；L載體 pBAD/gIIIA-vp28C1：空白對照；2~3：pBPCR 鑒定 of pBAD/gIIIA-vp28C-H

組載體 pBAD/gIIIA-vp28C1：空白對照；2~3：pBAPCR 鑒定n of pBAD/gIIIA-vp28C-Hs000；Lane 1：control；Lavp28C-Hsp70p 的表達時間的菌液在誘導表達完后進行 SDS-PAGE 電泳，表達蛋白（圖 1-4）,與理

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3481908