性別決定基因是決定性別的開關(guān),它控制著雙向潛能性腺分化為卵巢或是精巢。Amh（Anti-Miillerian hormone）及其受體AmhrⅡ（Anti-Mullerian hormone receptor type II）屬于TGF-β超家族成員,對四足動物的研究表明它們的功能是誘導(dǎo)雄性的繆勒氏管退化,但魚類并沒有繆勒氏管,卻存在Amh和AmhrⅡ,那么其作用有待闡明。近年來,一些研究表明TGF-β信號通路成員在魚類性別決定中起重要作用,如銀漢魚（Allanetta bleekeri）的Amhy、紅鰭東方鲀（Takifugu rubripes）的AmhrⅡ以及呂宋青鳉（Oryzias luzonensis）的GsdfY。尼羅羅非魚是重要的世界性養(yǎng)殖魚類,具有XX/XY性別決定類型,雄魚比雌魚生長快約50%,易于獲得單性魚苗以及全基因組測序已公開等優(yōu)點,所以,尼羅羅非魚是研究性別決定和分化分子機制的好材料,可以兼顧基礎(chǔ)和應(yīng)用兩個方面研究。本實驗室前期工作中克隆了尼羅羅非魚的性別決定候選基因Amhy/Amh,但其決定性別的功能還有待驗證。本研究擬通過CRISPR/Cas9介導(dǎo)的基因敲除... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

尼羅羅非魚Am

通過免疫組化方法對１０、３０、９０?ｄａｈ?Ａｍｈｙ／Ａｍｈ缺失后性別分化相關(guān)基因表??達(dá)的分析顯示：Ｃｙｐｌ９ａｌａ?（雌激素合成關(guān)鍵酶一芳香化酶）在Ａｍｈｙ／Ａｍｈ缺失卵??巢間質(zhì)細(xì)胞中有少量表達(dá)（圖２Ｅ、Ｆ、Ｊ、Ｎ），而在對照組中Ｃｙｐｌ９ａｌａ只在卵巢??間質(zhì)細(xì)胞表達(dá)（圖２?Ｈ）而在精巢不表達(dá)（圖２?Ｇ、Ｌ、Ｐ）。Ｄｍｒｔｌ在對照組精巢??支持細(xì)胞（圖２Ｃ、Ｋ、０）中表達(dá)，而在卵巢中不表達(dá)（圖２Ｄ）。??９０?ｄａｈ?３０?ｄａｈ?１０?ｄａｈ??樣｜＾＾｜變Ｉ??＿■酵麥??０?賺ｆＣＫｆｅｉ?Ｄｍｒｔｌ?—??＇ｍｍｍｗ??圖２組織學(xué)及免疫組化顯示１０、３０、‘?９０天敲除導(dǎo)致ＸＹ性逆轉(zhuǎn)。Ｃｙｐｌ９ａｌａ在卵??巢間質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，在ＸＹ雄性性腺中不表達(dá)（Ｇ、Ｌ、Ｐ），但是在ＸＹ性逆轉(zhuǎn)為卵巢間質(zhì)細(xì)胞中有表達(dá)（Ｅ、??Ｆ、Ｊ、Ｎ）而Ｄｍｒｔｌ不表達(dá)（Ａ、Ｂ、Ｉ、Ｍ）和對照精巢不同（Ｃ、Ｋ、０）。比例尺：Ａ，Ｃ，?Ｅ，?５０?ｎｍ；?Ｂ，??２９??

雌激素（Ｅ２）水平，以便分析Ａｍｈｙ／Ａｍｈ缺失對雌激素合成的影響。結(jié)果顯示：??Ａｍｈｙ／Ａｍｈ缺失的ＸＹ個體Ｅ２的水平比正常ＸＹ個體高，但沒有達(dá)到正常ＸＸ個??體水平（圖３）。??２４－１?Ｃ??１??ｏｘ?１?沙?？｜｜?ｎ＾ｉ??ｆ，２．?＿?Ｔ??１６．１??＾?圓?ｇ??０＿?■?——ｔ??ＸＸ，Ｃｔｒｌ?ＸＹ，?ＫＯ?ＸＹ，Ｃ＊ｒｌ??（ｎ＝５）?（ｎ＝８）?（ｎ＝５）??圖３與對照組相比，在ＸＹ個體敲除導(dǎo)致Ｅ２水平上升。數(shù)據(jù)表示測量的平均值土標(biāo)準(zhǔn)??差，誤差線上不同字母表示單因素方差統(tǒng)計分析后有顯著差異（Ｐ＜０．０５）；?ｎ代表檢測魚的尾數(shù)。??Ｆｉｇ．３?Ｋｎｏｃｋｏｕｔ?ｏｆ?Ａｍｈｙ／Ａｍｈ?ｉｎ?ｔｈｅ?ＸＹ?ｆｉｓｈ?ｒｅｓｕｌｔｅｄ?ｉｎ?ｉｎｃｒｅａｓｅｄ?ｓｅｒｕｍ?Ｅ２?ｌｅｖｅｌ?ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｗｉｔｈ??ｔｈｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｆｉｓｈ．?Ｒｅｓｕｌｔｓ?ａｒｅ?ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ?ａｓ?ｔｈｅ?ｍｅａｉｔｆｃＳＤ．?Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｌｅｔｔｅｒｓ?ｉｎｄｉｃａｔｅ?ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ?ａｔ?Ｐ＜０．０５?ａｓ??ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ?ｂｙ?ｏｎｅ－ｗａｙ?ＡＮＯＶＡ?ｆｏｌｌｏｗｅｄ?ｂｙ?ａ?ｐｏｓｔ?ｈｏｃ?ｔｅｓｔ?Ｓａｍｐｌｅ?ｎｕｍｂｅｒｓ?ａｒｅ?ｓｈｏｗｎ．??３．５敲除陽性魚ＡｍＡｙＡｍＡ蹄選及建系??生殖細(xì)胞傳遞突變是建立純合敲除個體的關(guān)鍵，ＡｍｈｙｌＡｔｎｈ突變ＧＯ代ＸＹ個??體精液和ＸＸ個體卵子受精成功獲得Ｆ１代個體

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]半滑舌鰨抗繆勒氏管激素（AMH）基因的克隆及組織表達(dá)分析[J]. 劉姍姍,孫冰,梁卓,張靜,陳松林.  中國水產(chǎn)科學(xué). 2013(01)
[2]櫛孔扇貝Fosmid文庫的構(gòu)建及基因組結(jié)構(gòu)特征分析[J]. 程潔,張玲玲,黃曉婷,張燦,王師,胡景杰,包振民.  中國海洋大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2008(01)
[3]Transformer基因與果蠅和線蟲的性別決定[J]. 劉輝,陳思禮,王國秀.  遺傳. 2005(01)
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[6]魚類性別決定及其機制的研究進(jìn)展[J]. 王德壽,吳天利,張耀光.  西南師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2000(03)

碩士論文
[1]羅非魚gsdf在性腺的表達(dá)及其在性別決定中的功能[D]. 楊惠惠.西南大學(xué) 2014



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