微囊藻毒素（MCs）是一類具有生物活性的單環(huán)七肽肝毒素，目前已知的異構(gòu)體超過80余種，其中毒性較強(qiáng)，研究較多的一種便是MC-LR。由于其能夠長時(shí)間存留在水體中，并能夠在生物體內(nèi)累積，對(duì)人類飲水安全和水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)都提出了挑戰(zhàn)。因此，目前的研究較多集中于水體中MC-LR的檢測和MC-LR細(xì)胞毒性等兩方面。凡納濱對(duì)蝦作為我國的主要經(jīng)濟(jì)水產(chǎn)動(dòng)物，在養(yǎng)殖過程中常常受到藍(lán)藻水華爆發(fā)的影響，水華產(chǎn)生的微囊藻毒素使得對(duì)蝦大規(guī)模死亡，水產(chǎn)行業(yè)受到極大的影響。目前已知的研究證明微囊藻毒素可以影響浮萍[1]、大型溞[2]、克氏原螯蝦[3]和白鰱[4]等多種水生生物的生理活動(dòng)，甚至導(dǎo)致死亡。凡納濱對(duì)蝦同樣作為受到MC直接影響的物種，MC對(duì)其造成影響的途徑及毒性機(jī)理卻尚不明晰。本研究通過第二代高通量測序、qRT-PCR等技術(shù)手段試圖尋找到MC-LR對(duì)凡納濱對(duì)蝦體液免疫相關(guān)基因表達(dá)量的影響情況及其致毒機(jī)理。在對(duì)健康成蝦分別注射MC-LR溶液和等量PBS溶液12h后，采集足量的對(duì)蝦肝胰腺和血液樣品，RNA抽提后得到總RNA樣品。將樣品進(jìn)行mRNA純化，分解成小片段，PCR擴(kuò)增構(gòu)建文庫等一系列操作之后，通過Illum... 

【文章來源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

轉(zhuǎn)錄本序列長度分布情況

圖 2-2 7175 個(gè)轉(zhuǎn)錄本 GO 功能注釋分類情況Fig. 2-2 Distributions of the Gene Ontology functional annotations for the three level-2classifications: biological process, cellular component, molecular function2.2.1.4 COG 注釋結(jié)果將所有轉(zhuǎn)錄本采用 BLAST 比對(duì) String 數(shù)據(jù)庫，得到的結(jié)果進(jìn)行 COG 分析得到相應(yīng)的功能注釋和歸類。其中 COG 數(shù)據(jù)庫中獲得注釋轉(zhuǎn)錄本 4588 條，KOG 數(shù)據(jù)庫中獲得注釋轉(zhuǎn)錄本 5,327 條，NOG 數(shù)據(jù)庫中獲得注釋轉(zhuǎn)錄本 77 條。根據(jù)功能的不同，以上注釋轉(zhuǎn)錄本可分為信息存儲(chǔ)和處理（information storage andprocessing）、細(xì)胞過程和信號(hào)傳遞（cellular processes and signaling）、新陳代謝（metabolism）及功能特征不明顯（poorly characterized）等四大類，又可進(jìn)一步細(xì)分為轉(zhuǎn)錄（transcription）、信號(hào)傳遞機(jī)制（signal transduction mechanisms）等 25小類。

圖 2-4 KOG 功能分類Fig. 2-4 Distributions of KOG functional classifications for the isogenes2.2.1.5 KEGG 通路注釋結(jié)果將所有轉(zhuǎn)錄本用 BLAST 與 KEGG 數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì)，共得到 7,955 條轉(zhuǎn)錄本得到相應(yīng)注釋，可以歸類到 311 條已知信號(hào)通路中。其中代謝通路（metabolic pathways）含有最多的與之對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)錄本，共計(jì) 1,278 條；次生代謝生物合成（Biosynthesis ofsecondary metabolites）、剪接體（Spliceosome）、RNA 轉(zhuǎn)運(yùn)（RNA transport）和癌癥通路（Pathways in cancer）等也檢測到較多轉(zhuǎn)錄本，數(shù)量分別為 372、243、224和 224 條。表 2-3 對(duì)應(yīng)轉(zhuǎn)錄本較多的通路（Top 10）Table 2-3 Signaling pathway of KEGG (Top 10)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]微囊藻毒素對(duì)克氏原螯蝦血細(xì)胞吞噬能力的影響[J]. 蘇曉明,樂亞玲,劉利平.  廣東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(11)
[2]凡納濱對(duì)蝦Crustin-like基因的克隆及在副溶血弧菌感染條件下的表達(dá)分析[J]. 張艷艷,劉小林,黃海洪,錢昭英,王憲宗,相建海,李義軍.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2012(12)
[3]Expression profiles of antimicrobial peptides （AMPs） and their regulation by Relish[J]. 王冬冬,李富花,李詩豪,溫榮,相建海.  Chinese Journal of Oceanology and Limnology. 2012(04)
[4]微囊藻毒素-LR對(duì)睪丸支持細(xì)胞活性及凋亡基因表達(dá)的影響[J]. 易丹,張豐泉,李超鋒,段麗菊,程學(xué)敏,陳姜,崔留欣,張慧珍.  現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué). 2011(24)
[5]微囊藻毒素對(duì)大鼠睪丸支持細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響[J]. 楊明峰,張豐泉,余曉齊,郭大眾,易丹,李超鋒,崔留欣,張慧珍.  環(huán)境與健康雜志. 2011(12)
[6]微囊藻毒素-LR對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞活性氧生成和脂質(zhì)過氧化的影響[J]. 農(nóng)清清,Takeuchi T,張志勇,何敏.  環(huán)境與健康雜志. 2011(08)
[7]微囊藻毒素-LR對(duì)羅非魚肝臟活性氧自由基含量及相關(guān)抗氧化酶活性的影響[J]. 陳家長,宋超,胡庚東,瞿建宏,孟順龍,范立民.  農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào). 2011(08)
[8]凡納濱對(duì)蝦免疫指標(biāo)變化與其養(yǎng)殖環(huán)境理化因子的關(guān)系[J]. 張華軍,李卓佳,張家松,郭志勛,文國樑,曹煜成,吳垠.  大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào). 2011(04)
[9]銅綠微囊藻對(duì)克氏原螯蝦幼蝦存活及成蝦幾種酶類的影響[J]. 樂亞玲,劉利平,李慷,晏軍,DIANA J S.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2011(08)
[10]活性氧在微囊藻毒素-LR誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡效應(yīng)中的作用探討[J]. 尹建勛,帥怡,王彥琴,肖萍,仲偉鑒.  環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué). 2011(07)



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