開發(fā)抗菌肽作為飼料添加劑,可避免耐藥性產(chǎn)生和藥物殘留等問題,對褐鱒養(yǎng)殖業(yè)健康綠色發(fā)展具有重要意義。通過原核表達途徑獲得褐鱒LEAP-2成熟肽融合表達蛋白,利用同源克隆方法,從褐鱒肝臟組織中克隆得到LEAP-2基因ORF序列,分析其氨基酸序列和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu),與其他物種比對并作同源性分析,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pET32a-mLEAP-2,原核表達。結(jié)果表明,褐鱒LEAP-2基因ORF全長291 bp,編碼96個氨基酸,其中氨基端信號肽由27個殘基組成,成熟肽含有41個殘基;根據(jù)比對結(jié)果發(fā)現(xiàn),在羧基端存在多個保守氨基酸殘基,其中包括4個高度保守半胱氨酸殘基,4個半胱氨酸殘基之間可形成兩對二硫鍵,推測其與LEAP-2抗菌活性有關(guān);同源性分析顯示褐鱒LEAP-2在進化上相對保守,氨基酸序列與大西洋鮭、虹鱒（LEAP-2A）、紅點鮭同源性均在94%以上;SDS-PAGE電泳分析顯示得到的重組蛋白分子質(zhì)量約為22.61 ku,與預(yù)期一致。研究結(jié)果有利于進一步探究褐鱒LEAP-2基因功能,為抗菌肽在養(yǎng)殖上的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2020,51(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

褐鱒LEAP-2氨基酸序列系統(tǒng)進化樹

含重組表達質(zhì)粒pET32a-mLEAP-2大腸桿菌BL21(DE3）被培養(yǎng)至OD值約為0.5后，通過IPTG誘導(dǎo)，對誘導(dǎo)0、1、2、3、4、5、6 h菌體總蛋白作SDS-PAGE電泳分析，同時取誘導(dǎo)4 h菌體，經(jīng)超聲破碎后將獲得沉淀和上清分別作SDS-PAGE電泳分析。結(jié)果如圖6所示，含重組質(zhì)粒菌體總蛋白在相對分子質(zhì)量約22.61 ku處有蛋白條帶，與預(yù)期相符，而在含pET32a空質(zhì)粒菌體總蛋白上未見該條帶，表明重組蛋白得到有效表達。另外，在菌體經(jīng)超聲破碎后離心得到上清和沉淀中均存在目的條帶，表明trxA-mLEAP-2融合蛋白除以可溶性蛋白形式表達外，還存在于包涵體中。圖6 重組蛋白表達SDS-PAGE電泳分析

重組蛋白表達SDS-PAGE電泳分析

【參考文獻】：
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本文編號：3451296