發(fā)布時(shí)間：2021-10-22 04:51

　　病原菌對(duì)宿主組織表面或細(xì)胞的粘附是其感染早期的關(guān)鍵步驟。對(duì)許多致病菌而言,首先要通過粘附素粘附到宿主的敏感受體,在機(jī)體局部產(chǎn)生毒素或侵入宿主表皮,最終滲透到宿主內(nèi)部,引發(fā)疾病。粘附已被視為致病菌重要的毒力因子之一。國內(nèi)外關(guān)于致病菌粘附的研究主要集中在人類致病菌上,水產(chǎn)養(yǎng)殖中致病菌粘附的研究還較為缺乏,對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物病原菌粘附機(jī)制的研究還鮮有報(bào)道。本文首先以海水養(yǎng)殖業(yè)中重要的致病菌河流弧菌為研究對(duì)象,采用轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽技術(shù)構(gòu)建了河流弧菌粘附缺陷突變體庫,采用間接ELISA技術(shù)篩選得到5株突變株,菌液PCR鑒定為轉(zhuǎn)座子插入引起的突變。進(jìn)一步采用染色體步移技術(shù)擴(kuò)增轉(zhuǎn)座子插入位點(diǎn)側(cè)翼序列。通過序列分析,其中19號(hào)、23號(hào)、60號(hào)三個(gè)突變株插入位點(diǎn)分別為還原型NO轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子基因、乙二醛酶基因、和β-1,4-甘露聚糖酶基因,而34號(hào)突變株的突變基因未找到同源序列,88號(hào)突變株沒有獲得得插入位點(diǎn)側(cè)翼序列。本研究還對(duì)突變株進(jìn)行趨化、成膜等生物學(xué)性狀的研究,結(jié)果表明,突變株對(duì)大黃魚表皮粘液的趨化能力和生物膜形成能力與野生株相比都有顯著性差異,其中,23號(hào)突變株趨化能力最弱,而19號(hào)突變株生物膜形成能力最弱。其... 

【文章來源】：集美大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 弧菌及弧菌病的研究進(jìn)展
        1.1.1 概述
        1.1.2 致病機(jī)理
    1.2 河流弧菌的研究進(jìn)展
        1.2.1 概述
        1.2.2 河流弧菌研究現(xiàn)狀
    1.3 嗜水氣單胞菌研究進(jìn)展
        1.3.1 概述
        1.3.2 嗜水氣單胞菌毒力因子
    1.4 細(xì)菌粘附研究進(jìn)展
        1.4.1 粘附作用
        1.4.3 細(xì)菌粘附研究概況
    1.5 轉(zhuǎn)座子及轉(zhuǎn)座誘變技術(shù)
        1.5.1 轉(zhuǎn)座子
        1.5.2 轉(zhuǎn)座標(biāo)簽技術(shù)
    1.6 主要研究?jī)?nèi)容和研究意義
        1.6.1 河流弧菌粘附缺陷突變體庫的構(gòu)建和突變株的篩選
        1.6.2 河流弧菌粘附相關(guān)基因的克隆與鑒定
        1.6.3 河流弧菌粘附相關(guān)基因功能研究
        1.6.4 嗜水氣單胞菌粘附相關(guān)基因的功能研究
第2章 河流弧菌粘附缺陷突變株的篩選
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)菌及質(zhì)粒
        2.1.2 培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 突變庫的構(gòu)建
        2.2.2 河流弧菌粘附缺陷突變株的篩選
        2.2.3 突變菌株的PCR鑒定
        2.2.4 基因組步移技術(shù)擴(kuò)增轉(zhuǎn)座子插入位點(diǎn)側(cè)翼序列
        2.2.5 突變株生物性狀分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 質(zhì)粒的提取及轉(zhuǎn)化受體菌E.coli Sm10
        2.3.2 ELISA方法篩選河流弧菌粘附缺陷突變株
        2.3.3 基因組DNA提取
        2.3.4 突變菌株的PCR鑒定
        2.3.5 轉(zhuǎn)座子插入位點(diǎn)側(cè)翼序列分析
        2.3.6 生物學(xué)性狀分析結(jié)果
    2.4 討論
第3章 嗜水氣單胞菌粘附相關(guān)基因的功能分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)菌及質(zhì)粒
        3.1.2 培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 嗜水氣單胞菌粘附缺陷突變體庫的構(gòu)建和突變株的篩選
        3.2.2 補(bǔ)償株的構(gòu)建
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 基因組DNA及表達(dá)載體pACYC184提取結(jié)果
        3.3.2 目的基因擴(kuò)增及測(cè)序測(cè)定
        3.3.3 目的基因及表達(dá)載體雙酶切
        3.3.4 重組質(zhì)粒鑒定結(jié)果
        3.3.5 western blot鑒定結(jié)果
        3.3.6 運(yùn)動(dòng)性
        3.3.7 體外粘附實(shí)驗(yàn)
        3.3.8 生物膜形成實(shí)驗(yàn)
    3.4 討論
第4章 小結(jié)與展望
    4.1 主要結(jié)論
    4.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3450419