尼羅羅非魚的Galectin-8基因的原核表達(dá)及條件優(yōu)化
發(fā)布時間：2021-10-18 08:32
Galectin-8屬于S型凝集素,是一種內(nèi)源性凝集素,具有高親力,含β-半乳糖苷,可識別重要的病原分子[1]。該蛋白質(zhì)有2個功能結(jié)構(gòu)域,均提供該家族中其他蛋白質(zhì)類似的保守序列[2]。該研究基于尼羅羅非魚Galectin-8 NCBI上發(fā)表的基因序列,利用primer5.0設(shè)計1對引物,構(gòu)建尼羅羅非魚Galectin-8基因的原核表達(dá)載體,將重組后的質(zhì)粒pGEX-4T-1-Galectin-8導(dǎo)入大腸桿菌中,通過PCR、連接、轉(zhuǎn)化等,進行原核表達(dá)。對影響因素進行條件優(yōu)化,使用優(yōu)化后的濃度、時間、溫度條件表達(dá)Galectin-8重組蛋白能得到最優(yōu)表達(dá)量。Western blot檢測純化后的重組蛋白,結(jié)果顯示,重組蛋白可以很好地結(jié)合GST-Tag標(biāo)簽的單克隆抗體,實驗進一步證明羅非魚Galectin-8的重組蛋白被成功表達(dá),為羅非魚Galectin-8后續(xù)相關(guān)功能的研究奠定了基礎(chǔ)。
【文章來源】：安徽農(nóng)學(xué)通報. 2020,26(05)
【文章頁數(shù)】：4 頁
【部分圖文】：
Galectin-8基因克隆
重組Galectin-8的質(zhì)粒BamHI和XhoI酶切，在891bp處有1條大小接近的條帶，與pGEX-4T載體在4969bp處有1條大小一致的條帶，且插入的片段測序比對后同樣顯示是Galectin-8，表明pGEX-4T-Galectin-8被成功構(gòu)建成原核表達(dá)載體。2.3 大腸桿菌的誘導(dǎo)表達(dá)
只有誘導(dǎo)的菌株在59kD的位置有條帶，未誘導(dǎo)的對照組則無此條帶（圖3）。GST標(biāo)簽的PGEX-4T-1空載體大小是26kD，而Galectin-8預(yù)測的蛋白分子量為33kD，重組后的蛋白大小為59kD，該分子量與實驗結(jié)果一致，從而證明重組Galectin-8蛋白表達(dá)成功。2.4 大腸桿菌誘導(dǎo)表達(dá)條件優(yōu)化
【參考文獻】：
期刊論文
[1]尼羅羅非魚TGF-β1蛋白原核表達(dá)及多克隆抗體的制備[J]. 余艷玲,馮鵬霏,潘傳燕,陳曉漢,林勇,張永德,羅洪林. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2019(06)
[2]尼羅羅非魚PPARδ的原核表達(dá)及其多抗制備和純化[J]. 潘傳燕,馮鵬霏,張永德,羅洪林. 福建農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2019(09)
[3]尼羅羅非魚補體3基因片段的原核表達(dá)及條件優(yōu)化[J]. 牛金中,黃瑜,湯菊芬,魯義善,汪志文,鄭琦,蔡佳,簡紀(jì)常. 廣東海洋大學(xué)學(xué)報. 2018(02)
[4]大彈涂魚（Boleophthalmus pectinirostris）Gal-8L基因序列及其細(xì)菌凝集活性的鑒定[J]. 梁亞芳,史雨紅,苗亮,陳炯. 海洋與湖沼. 2018(02)
[5]羅非魚常見疾病及防治[J]. 黃紀(jì)兵,肖鶴. 科學(xué)養(yǎng)魚. 2017(10)
[6]尼羅羅非魚NCCRP-1基因的原核表達(dá)及條件優(yōu)化[J]. 黃瑜,牛金中,湯菊芬,魯義善,汪志文,鄭琦,蔡佳,簡紀(jì)常. 基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2018(09)
[7]羅非魚源無乳鏈球菌滅活疫苗免疫效果的研究[J]. 朱潔蓮,高婷婷,鐘孝俊,劉廣錦,姚火春. 中國獸醫(yī)科學(xué). 2017(05)
[8]魁蚶（Scapharca broughtonii）半乳糖凝集素（SbGal）基因cDNA的克隆及表達(dá)分析[J]. 鄭利兵,吳彪,劉志鴻,周麗青,孫秀俊,田吉騰,楊愛國,鄭言鑫. 海洋與湖沼. 2015(05)
[9]galectin-3在子宮內(nèi)膜病變中表達(dá)的研究[J]. 張巖,佟盛春,王永來,趙潤秋. 中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2008(05)
[10]半乳糖凝集素-1的融合克隆及純化[J]. 王曉輝,張浩,楊智洪,葉棋濃. 生物技術(shù)通訊. 2008(01)
碩士論文
[1]血漿半乳糖凝集素-3水平與多囊卵巢綜合征中慢性炎癥和胰島素抵抗的相關(guān)性研究[D]. 吳銳.重慶醫(yī)科大學(xué) 2018
[2]Galectin-4表達(dá)失調(diào)與肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展及相關(guān)分子機制初步研究[D]. 陳燦燦.福建醫(yī)科大學(xué) 2017
[3]無乳鏈球菌和海豚鏈球菌滅活疫苗對羅非魚的免疫效果[D]. 付天增.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[4]羅非魚源無乳鏈球菌嵌合型亞單位疫苗與DNA疫苗的研制及免疫效果評價[D]. 李桂歡.廣東海洋大學(xué) 2014
[5]中國羅非魚出口貿(mào)易國際競爭力研究[D]. 王斌.江南大學(xué) 2011
本文編號：3442531
【文章來源】：安徽農(nóng)學(xué)通報. 2020,26(05)
【文章頁數(shù)】：4 頁
【部分圖文】：
Galectin-8基因克隆
重組Galectin-8的質(zhì)粒BamHI和XhoI酶切，在891bp處有1條大小接近的條帶，與pGEX-4T載體在4969bp處有1條大小一致的條帶，且插入的片段測序比對后同樣顯示是Galectin-8，表明pGEX-4T-Galectin-8被成功構(gòu)建成原核表達(dá)載體。2.3 大腸桿菌的誘導(dǎo)表達(dá)
只有誘導(dǎo)的菌株在59kD的位置有條帶，未誘導(dǎo)的對照組則無此條帶（圖3）。GST標(biāo)簽的PGEX-4T-1空載體大小是26kD，而Galectin-8預(yù)測的蛋白分子量為33kD，重組后的蛋白大小為59kD，該分子量與實驗結(jié)果一致，從而證明重組Galectin-8蛋白表達(dá)成功。2.4 大腸桿菌誘導(dǎo)表達(dá)條件優(yōu)化
【參考文獻】：
期刊論文
[1]尼羅羅非魚TGF-β1蛋白原核表達(dá)及多克隆抗體的制備[J]. 余艷玲,馮鵬霏,潘傳燕,陳曉漢,林勇,張永德,羅洪林. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2019(06)
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[3]尼羅羅非魚補體3基因片段的原核表達(dá)及條件優(yōu)化[J]. 牛金中,黃瑜,湯菊芬,魯義善,汪志文,鄭琦,蔡佳,簡紀(jì)常. 廣東海洋大學(xué)學(xué)報. 2018(02)
[4]大彈涂魚（Boleophthalmus pectinirostris）Gal-8L基因序列及其細(xì)菌凝集活性的鑒定[J]. 梁亞芳,史雨紅,苗亮,陳炯. 海洋與湖沼. 2018(02)
[5]羅非魚常見疾病及防治[J]. 黃紀(jì)兵,肖鶴. 科學(xué)養(yǎng)魚. 2017(10)
[6]尼羅羅非魚NCCRP-1基因的原核表達(dá)及條件優(yōu)化[J]. 黃瑜,牛金中,湯菊芬,魯義善,汪志文,鄭琦,蔡佳,簡紀(jì)常. 基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2018(09)
[7]羅非魚源無乳鏈球菌滅活疫苗免疫效果的研究[J]. 朱潔蓮,高婷婷,鐘孝俊,劉廣錦,姚火春. 中國獸醫(yī)科學(xué). 2017(05)
[8]魁蚶（Scapharca broughtonii）半乳糖凝集素（SbGal）基因cDNA的克隆及表達(dá)分析[J]. 鄭利兵,吳彪,劉志鴻,周麗青,孫秀俊,田吉騰,楊愛國,鄭言鑫. 海洋與湖沼. 2015(05)
[9]galectin-3在子宮內(nèi)膜病變中表達(dá)的研究[J]. 張巖,佟盛春,王永來,趙潤秋. 中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2008(05)
[10]半乳糖凝集素-1的融合克隆及純化[J]. 王曉輝,張浩,楊智洪,葉棋濃. 生物技術(shù)通訊. 2008(01)
碩士論文
[1]血漿半乳糖凝集素-3水平與多囊卵巢綜合征中慢性炎癥和胰島素抵抗的相關(guān)性研究[D]. 吳銳.重慶醫(yī)科大學(xué) 2018
[2]Galectin-4表達(dá)失調(diào)與肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展及相關(guān)分子機制初步研究[D]. 陳燦燦.福建醫(yī)科大學(xué) 2017
[3]無乳鏈球菌和海豚鏈球菌滅活疫苗對羅非魚的免疫效果[D]. 付天增.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[4]羅非魚源無乳鏈球菌嵌合型亞單位疫苗與DNA疫苗的研制及免疫效果評價[D]. 李桂歡.廣東海洋大學(xué) 2014
[5]中國羅非魚出口貿(mào)易國際競爭力研究[D]. 王斌.江南大學(xué) 2011
本文編號：3442531
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