為了探究條石鯛精子最適紫外滅活劑量及其誘導(dǎo)大黃魚雌核發(fā)育的效果,利用Ringer氏液將條石鯛精子稀釋40倍后,置于輻射強(qiáng)度1 330～1 350μW·cm-2的紫外燈下進(jìn)行滅活,然后與正常大黃魚卵子進(jìn)行人工授精和冷休克處理（水溫3℃,受精2 min后,冷休克10 min）。結(jié)果表明:條石鯛精子最適紫外滅活劑量為80 mJ·cm-2,隨著照射劑量的增加,條石鯛精子表現(xiàn)出典型的Her-twig效應(yīng)。利用流式細(xì)胞儀檢測倍性,未經(jīng)冷休克處理的受精卵全部為單倍體,冷休克處理的均為二倍體,表明精子滅活有效。性腺組織切片結(jié)果顯示了雌核發(fā)育群體的全雌性。實驗結(jié)果表明:條石鯛精子可作為一種合適的激活源,誘導(dǎo)大黃魚的雌核發(fā)育。 

【文章來源】：浙江海洋大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2020,39(02)北大核心

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紫外線照射時間對大黃魚孵化率的影響

未經(jīng)冷休克處理的受精卵孵化后均為畸形，表現(xiàn)出顯著的“單倍體綜合征”，且出膜后全部死亡(圖2)。倍性檢測結(jié)果顯示，雌核發(fā)育二倍體和正常二倍體的DNA相對含量均為200，而單倍體的DNA含量為100(圖2)。說明條石鯛精子中的DNA未進(jìn)入雌核發(fā)育大黃魚的基因組；同時還表明通過冷休克的方式可以實現(xiàn)使大黃魚染色體數(shù)目加倍的目的。2.4 性腺組織切片檢測

人工雌核發(fā)育可分為減數(shù)分裂雌核發(fā)育和有絲分裂雌核發(fā)育，前者通過抑制第二極體排出，后者則通過抑制第一次有絲分裂而使染色體加倍。但兩種方法均需要利用精子對卵子進(jìn)行激活，因此“激活源”的選擇對于雌核發(fā)育的成功率至關(guān)重要。有學(xué)者指出[15]，大多數(shù)屬間以上的雜交相容性都很低，大部分胚胎在孵化期前后陸續(xù)死亡，表現(xiàn)出極低的孵化率。條石鯛和大黃魚分屬不同科，相比于黃姑魚和鮸魚[11-12]，在遺傳進(jìn)化上條石鯛與大黃魚親緣關(guān)系更遠(yuǎn)。實驗中發(fā)現(xiàn)，條石鯛和大黃魚的雜種雖然可以出膜，但在開口之前全部死亡，這樣即使有少量雄核的遺傳物質(zhì)未被完全滅活，個體也會在出膜后自然淘汰，避免了正常二倍體混入的可能。精子的遺傳物質(zhì)的失活是影響雌核發(fā)育能否成功的關(guān)鍵因素[16]，但對于誘導(dǎo)雌核發(fā)育究竟是選擇同源精子還是異源精子，目前尚無統(tǒng)一結(jié)論。有研究表明：同源精子成功誘導(dǎo)雌核發(fā)育所需紫外輻射劑量更高[12]，而使用異源精子誘導(dǎo)雌核發(fā)育能顯著提高雌核發(fā)育子代成活率[17-18]。本研究中，將條石鯛精子用常溫Ringer氏液稀釋40倍后，置于紫外燈下進(jìn)行滅活，當(dāng)輻射強(qiáng)度為80 m J·cm-2時，大黃魚受精率和孵化率最高。而汪倩鳳等[12]利用黃姑魚精子誘導(dǎo)大黃魚雌核發(fā)育，黃姑魚精子紫外滅活處理的最適劑量則為198m J·cm-2，另有研究表明[19]同源精子誘導(dǎo)大黃魚雌核發(fā)育，精子紫外滅活劑量在253～406 m J·cm-2均能成功誘導(dǎo)，這些實驗結(jié)果與本研究存在較大差異，可能是因為本研究中精液滅活是在常溫下進(jìn)行，而上述其他研究則是在4℃下或冰面上進(jìn)行。精子的適宜紫外滅活劑量隨魚種類不同而存在較大差異，如條斑星鰈Verasper moseri精子為40～45 m J·cm-2[20]，大西洋鱈Gadus morhua精子為221 m J·cm-2[21]，斜帶石斑魚Epinephelus coioides精子為518 m J·cm-2[22]。同樣，精子保存液的種類也會對同種魚類精子的滅活劑量產(chǎn)生影響，如黃姑魚精子用不同的精子保存液稀釋后(Ringer保存液和Hanks保存液)，其最適紫外滅活劑量分別為420 m J·cm-2[23]和228 m J·cm-2[24]，存在較大差異。此外，滅活時精液的溫度、精液的稀釋倍數(shù)和精液厚度等因素[25]，也會造成最適滅活劑量的差異。因此實際操作中，一方面可以通過顯微鏡觀察紫外線照射后精子的活力，另一方面還可以通過觀察雌核發(fā)育后代的孵化率來判斷最適的滅活劑量。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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