卵泡抑素（Follistatin，F(xiàn)st）為首先分離于哺乳動物卵泡液中的糖基化單鏈多肽，可以通過與activin蛋白的結(jié)合抑制促卵泡激素（follicle stimulating hormone，F(xiàn)SH）的分泌。卵泡抑素不僅可以阻礙activin蛋白的作用，還能降低包括myostatin（MSTN）、GDF-9、bone morphogenetic proteins （BMPs）在內(nèi)的其它TGF-β家族成員功能的發(fā)揮。通過與這些TGF-β家族成員的結(jié)合，卵泡抑素廣泛參與了生物體多種生理功能的調(diào)控，包括繁殖、生長發(fā)育、神經(jīng)誘導、滲透壓調(diào)節(jié)、肌細胞生成和免疫調(diào)節(jié)。作為一個編碼多功能調(diào)控蛋白的基因，fst在多種高等脊椎動物中得到了發(fā)現(xiàn)，并被證實廣泛表達于生物體的各個組織。然而，報道魚類fst基因結(jié)構(gòu)、表達模式及功能的研究至今仍然有限。為了進一步研究fst基因在硬骨魚體內(nèi)發(fā)揮的作用，我們使用Real-Time PCR技術分析和檢測了不同發(fā)育階段及性別大黃魚fst基因的表達，以及大黃魚幼魚不同饑餓及再投喂階段各組織fst基因的表達。研究結(jié)果表明，fst基因在大黃魚胚胎發(fā)育的原腸胚期（9h pos... 

【文章來源】：寧波大學浙江省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 綜述
    1.1 fst 基因的發(fā)現(xiàn)及分子結(jié)構(gòu)
    1.2 fst 基因生物學作用的研究
        1.2.1 fst 基因作用的分子生物學機制
        1.2.2 fst 基因的各種生物學功能
    1.3 fst 基因在硬骨魚類中的進化
        1.3.1 硬骨魚進化樹分析中兩類 fst 基因的發(fā)現(xiàn)
        1.3.2 硬骨魚 fst 基因染色體定位與進化機制
        1.3.3 硬骨魚兩類 fst 基因的不均等進化
    1.4 fst 基因表達情況的研究
        1.4.1 fst 基因的表達與疾病的關系
        1.4.2 fst 基因在魚類體內(nèi)的表達
            1.4.2.1 fst 基因在斑馬魚和大西洋鮭魚體內(nèi)的表達差異分析
            1.4.2.2 fst 基因在斑馬魚和大西洋鮭魚胚胎發(fā)育時期的表達
            1.4.2.3 fst 基因在不同肌肉組織中表達的研究
    1.5 fst 基因與 MSTN 基因間的關系及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的應用
2 大黃魚個體發(fā)育早期階段 fst 基因的表達
    2.1 前言
    2.2 樣品采集與實驗設計
    2.3 主要試劑
        2.3.1 RNA 操作相關試劑
        2.3.2 分子克隆相關試劑
        2.3.3 普通 PCR 及 Real-time PCR 擴增相關試劑
    2.4 實驗方法
        2.4.1 總 RNA 的提取
            2.4.1.1 總 RNA 抽提注意事項
            2.4.1.2 總 RNA 抽提方法
            2.4.1.3 總 RNA 去除 DNA 污染
            2.4.1.4 總 RNA 完整性的檢測
            2.4.1.5 總 RNA 濃度、純度的檢測
        2.4.2 cDNA 第一鏈的合成
        2.4.3 β-actin 及 fst 基因的定量引物設計
        2.4.4 標準質(zhì)粒的構(gòu)建
            2.4.4.1 β-actin 及 fst 基因普通 PCR 的擴增和檢測
            2.4.4.2 普通 PCR 產(chǎn)物回收與純化
            2.4.4.3 感受態(tài)細胞的制備
            2.4.4.4 β-actin 及 fst 基因 PCR 產(chǎn)物與載體的連接
            2.4.4.5 轉(zhuǎn)化和陽性克隆的篩選
            2.4.4.6 測序
            2.4.4.7 β-actin 及 fst 基因重組質(zhì)粒提取
            2.4.4.8 β-actin 及 fst 基因重組質(zhì)粒質(zhì)粒濃度檢測及稀釋
        2.4.5 Real-time PCR 擴增
        2.4.6 數(shù)據(jù)處理
    2.5 實驗結(jié)果
        2.5.1 RNA 的提取
        2.5.2 標準質(zhì)粒的構(gòu)建
            2.5.2.1 標準質(zhì)粒的檢測
            2.5.2.2 標準質(zhì)粒濃度檢測及稀釋
        2.5.3 Real-time PCR 標準曲線的構(gòu)建
            2.5.3.1 通過 Real-time PCR 檢測 10 倍梯度稀釋的標準質(zhì)粒
            2.5.3.2 β-actin 基因及 fst 基因標準曲線擴增效率一致性檢測
        2.5.4 大黃魚個體發(fā)育早期階段 fst 基因的表達
    2.6 討論
3 大黃魚 fst 基因組織特異性表達
    3.1 前言
    3.2 樣品采集與實驗設計
    3.3 主要試劑
        3.3.1 RNA 操作相關試劑
        3.3.2 普通 PCR 及 Real-time PCR 擴增相關試劑
    3.4 實驗方法
        3.4.1 總 RNA 的提取
        3.4.2 cDNA 第一鏈的合成
        3.4.3 β-actin 及 fst 基因的定量引物設計
        3.4.4 Real-time PCR 擴增
        3.4.5 數(shù)據(jù)處理
    3.5 實驗結(jié)果
        3.5.1 不同年齡大黃魚 fst 基因組織特異性表達
        3.5.2 不同性別大黃魚 fst 基因組織特異性表達
    3.6 討論
4 大黃魚不同饑餓階段 fst 基因的組織表達
    4.1 前言
    4.2 樣品采集與實驗設計
    4.3 主要試劑
        4.3.1 RNA 操作相關試劑
        4.3.2 普通 PCR 及 Real-time PCR 擴增相關試劑
    4.4 實驗方法
        4.4.1 總 RNA 的提取
        4.4.2 cDNA 第一鏈的合成
        4.4.3 β-actin 及 fst 基因的定量引物設計
        4.4.4 Real-time PCR 擴增
        4.4.5 數(shù)據(jù)處理
    4.5 實驗結(jié)果
        4.5.1 不同饑餓階段腦組織 fst 基因表達
        4.5.2 不同饑餓階段心組織 fst 基因表達
        4.5.3 不同饑餓階段肝組織 fst 基因表達
        4.5.4 不同饑餓階段腎組織 fst 基因表達
        4.5.5 不同饑餓階段脾組織 fst 基因表達
        4.5.6 不同饑餓階段肌肉組織 fst 基因表達
        4.5.7 不同饑餓階段性腺組織 fst 基因表達
        4.5.8 不同饑餓階段鰓組織 fst 基因表達
        4.5.9 不同饑餓階段眼組織 fst 基因表達
        4.5.10 不同饑餓階段腸組織 fst 基因表達
    4.6 討論
5 結(jié)論
參考文獻
在學研究成果
致謝



本文編號：3431562