免疫接種疫苗是防治魚類細(xì)菌性、病毒性疾病的有效方法。目前，疫苗免疫方式主要以注射、浸泡等方法為主，對于免疫效果的評價則除了通過魚類血清及黏液抗體水平變化、酶（超氧化物歧化酶、溶菌酶、堿性磷酸酶等）活、淋巴細(xì)胞數(shù)量、吞噬作用、補(bǔ)體活性等指標(biāo)來判定外，從基因水平對疫苗免疫效果進(jìn)行研究也越來越受到關(guān)注。本論文利用實驗室保存的鰻弧菌（Vibrio anguillarum）菌種，制備了福爾馬林全菌滅活疫苗，采用注射和浸泡兩種方式分別免疫牙鲆，應(yīng)用實時熒光定量PCR法檢測了免疫后牙鲆17種免疫相關(guān)基因表達(dá)的變化。論文主要內(nèi)容如下：實驗將健康牙鲆分為四組，每組60尾，第一組浸泡于濃度為1×108CFU/mL滅活疫苗菌液中，連續(xù)充氣浸泡30min；第二組浸泡于海水中30min，作為浸泡組對照；第三組腹腔注射濃度為1×108CFU/mL的鰻弧菌滅活疫苗，每尾0.1mL；第四組腹腔注射0.1mLPBS，作為注射組對照。于免疫后0h、4h、8h、12h、24h、48h、72h、96h、7d、14d十個時間點取樣，每組取5尾，分別剪取牙鲆脾臟、頭腎和鰓3種組織，提取總mRNA并反轉(zhuǎn)錄為cDNA，Primer ... 

【文章來源】：中國海洋大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 漁用疫苗及其應(yīng)用
        1.1.1 漁用疫苗的類型
        1.1.2 漁用疫苗的接種方式
        1.1.3 疫苗免疫效果的評價機(jī)制
    1.2 魚類免疫相關(guān)基因
        1.2.1 Toll 樣受體（TLRs）及其信號通路
        1.2.2 細(xì)胞因子
        1.2.3 主要組織相容性復(fù)合體（MHC）
        1.2.4 T 細(xì)胞表面標(biāo)志
        1.2.5 免疫球蛋白（Ig）
        1.2.6 其他免疫相關(guān)分子
    1.3 本研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 試劑與儀器
        2.1.2 實驗動物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 鰻弧菌全菌滅活疫苗的制備
        2.2.2 牙鲆的免疫及取樣
        2.2.3 總 RNA 的提取及質(zhì)量檢測
        2.2.4 cDNA 第一鏈的合成
        2.2.5 熒光定量 PCR 所用引物的設(shè)計與驗證
        2.2.6 熒光定量 PCR 檢測
        2.2.7 數(shù)據(jù)處理及分析
3 結(jié)果
    3.1 熒光定量 PCR 所用引物的獲得
    3.2 TLR2 在脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
    3.3 TLR5M 在脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
    3.4 MyD88 在脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
    3.5 NF-κB 在脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
    3.6 IL-1β在脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
    3.7 TNF α在脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
    3.8 IL-6 在脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
    3.9 IFNγ在脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
    3.10 CXC 在脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
    3.11 MHCⅠ在脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
    3.12 MHCⅡ在脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
    3.13 CD4 在脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
    3.14 CD8 在脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
    3.15 IgM 在脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
    3.16 C3 在脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
    3.17 c 型溶菌酶在脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
    3.18 HSP70 在脾臟、頭腎和鰓中的表達(dá)
4 討論
    4.1 TLR 信號通路 4 種基因的表達(dá)分析
    4.2 細(xì)胞因子類相關(guān)基因的表達(dá)分析
    4.3 細(xì)胞表面分子相關(guān)基因的表達(dá)分析
    4.4 免疫球蛋白 IgM 基因的表達(dá)分析
    4.5 補(bǔ)體 C3 基因的表達(dá)分析
    4.6 其他免疫相關(guān)基因的表達(dá)分析
5 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡歷
碩士期間發(fā)表文章


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]疫苗在水產(chǎn)養(yǎng)殖病害防治中的作用及應(yīng)用前景(連載一)[J]. 王玉堂.  中國水產(chǎn). 2013(03)
[2]水產(chǎn)口服疫苗研究進(jìn)展[J]. 黃鈞,施金谷,陳明,黃艷華.  廣西畜牧獸醫(yī). 2013(01)
[3]3種免疫途徑對嗜水氣單胞菌滅活疫苗保護(hù)作用的影響[J]. 劉雨果,潘厚軍,石存斌,吳淑勤.  廣東海洋大學(xué)學(xué)報. 2011(04)
[4]斜帶石斑魚浸泡免疫哈維氏弧菌滅活疫苗后MHC-Ⅱ類分子的表達(dá)變化[J]. 王慶,吳光輝,鞏華,劉永奎,劉春,石存斌,吳淑勤.  廣東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2010(12)
[5]我國水產(chǎn)疫苗的研究現(xiàn)狀[J]. 黃輝,齊振雄,余露軍,吳勤超.  湖南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2010(21)
[6]魚類免疫球蛋白的研究進(jìn)展[J]. 侯月娥,馮娟,楊清華,于博,寧章勇,孔小明.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2010(17)
[7]哈維氏弧菌滅活疫苗在養(yǎng)殖大黃魚中的應(yīng)用與評價[J]. 沈錦玉,許文軍,尹文林,曹錚,潘曉藝,施慧,郝貴杰.  大連海洋大學(xué)學(xué)報. 2010(03)
[8]羅非魚感染鏈球菌后hsp70基因表達(dá)研究[J]. 王瑞,黃艷華,陳明,梁萬文,黃鈞.  廣西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2010(04)
[9]嗜水氣單胞菌、愛德華氏菌滅活菌苗免疫保護(hù)及藥物治療試驗[J]. 鄧顯文,謝芝勛,劉加波,謝志勤,謝麗基,龐耀珊.  廣西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2010(03)
[10]褐牙鲆腹水癥病原菌的分離鑒定及其滅活疫苗的研制[J]. 孫祎敏,李楠,宋杰,李曉玥,申紅旗,王風(fēng)敏,李全振,曹杰英,趙寶華.  水產(chǎn)科學(xué). 2009(11)

博士論文
[1]半滑舌鰨（Cynoglossus semilaevis）TLR9及其信號傳導(dǎo)相關(guān)基因的克隆與表達(dá)[D]. 于燕.中國海洋大學(xué) 2009

碩士論文
[1]鯉魚MyD88基因的分子克隆及功能的初步研究[D]. 鄭琳琳.山東師范大學(xué) 2010
[2]MHC-Ⅱ類分子在鯉魚黏膜免疫中的作用[D]. 張彥.山東師范大學(xué) 2010
[3]海豚鏈球菌（Streptococcus iniae）疫苗對淡、海水養(yǎng)殖魚類的保護(hù)性試驗[D]. 張生.西南大學(xué) 2007



本文編號：3426830