當(dāng)前,中國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)規(guī)模已經(jīng)達到世界水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的70%,且比重呈現(xiàn)逐年遞增的趨勢。與此同時,病原菌的傳播與侵染給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成的損失也越來越嚴重。嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophilia）作為一種常見的條件致病菌能夠使魚類患敗血癥,引發(fā)出血性敗血癥、眼眶蜂窩織炎和眼球破裂等癥狀,最終導(dǎo)致魚類死亡。此外,它還是人-畜-魚共患致病菌,嚴重時甚至可能危害到人類的生命健康。疫苗免疫被認為是抑制嗜水氣單胞菌感染最有效的途徑之一,但是疫苗存在佐劑、運送、免疫方式等問題,使其規(guī)�；a(chǎn)與使用受到限制。因此,當(dāng)前迫切需要篩選有效的免疫保護性候選蛋白以及一種良好的疫苗遞送佐劑以控制該疾病的傳播。課題組前期研究發(fā)現(xiàn),在缺鐵環(huán)境下高表達的嗜水氣單胞菌外膜蛋白能夠顯著增強斑馬魚的免疫能力,提示鐵離子相關(guān)外膜蛋白可能作為細菌的疫苗候選蛋白,但是這些候選蛋白的免疫效果可能因為佐劑以及免疫宿主方式等問題受到限制。因此尋找一種更持續(xù)、穩(wěn)定和高效的佐劑是當(dāng)前此類漁用疫苗開發(fā)研究的熱點問題。近年來,納米材料中的單壁碳納米管（Single-walled carbon nanotube,SWCNTs）通過功能... 

【文章來源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

靶基因PCR擴增條帶M:DNAmaker;條帶1–7分別為:AHA_0854(1071bp),AHA_1512(1863bp),AHA_1698

單壁碳納米管載嗜水氣單胞菌外膜蛋白亞單位疫苗的評價1.2 重組菌雙酶切驗證通過質(zhì)粒提取試劑盒對陽性菌提取重組載體。根據(jù)表 5 所示重組載體酶切位，選取對應(yīng)酶對重組載體進行雙酶切驗證，在雙酶切之后，目的片段和質(zhì)粒分，如 3-2 圖中所示，由圖可知，雙酶切后核酸膠檢測出來兩條帶，分別為 pET-32a粒大小 5900bp 位置以及各自目的基因大小位置，發(fā)現(xiàn)與序列大小一致，結(jié)果確。

圖 3-3 重組蛋白誘導(dǎo)表達M: 蛋白Marker; 條帶1, 大腸桿菌BL21陰性對照; 條帶 2–8分別為:A0KGK5, P5587A0KIY3, A0KPP0, A0KH89, A0KHR9 和 A0KLQ6.Fig 3-3 The expression of recombinants induced by IPTG.ne M: protein Marker; Lane 1, E.coli BL21 negative control; lanes 2–8: A0KGK5, P55870,A0KIY3, A0KPP0, A0KH89, A0KHR9 and A0KLQ6, respectively. 重組菌誘導(dǎo)表達后純化將重組菌進行大量表達并進行超聲破碎后，離心收集上清與沉淀，通過-PAGE 檢測不同蛋白的表達位置，并根據(jù)方法中上清沉淀的不同純化方法在中進行親和層析純化，所得蛋白純化結(jié)果經(jīng) SDS-PAGE 檢測如圖所示。從可知，目的蛋白條帶都較清晰且相對單一，而且目的條帶位置與對應(yīng)蛋白大致，表明純化蛋白效果好，無明顯雜帶，7 種蛋白皆成功過表達并純化。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]抗生素的發(fā)展史及濫用現(xiàn)象——與超級細菌戰(zhàn)斗到底[J]. 姚易安.  當(dāng)代化工研究. 2018(11)
[2]2018世界漁業(yè)和水產(chǎn)養(yǎng)殖狀況報告[J]. 小遠.  漁業(yè)致富指南. 2018(21)
[3]抗生素濫用的調(diào)查及研究[J]. 彭遠雷.  貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2018(05)
[4]疫苗及其在水生動物疾病預(yù)防中的應(yīng)用(三)[J]. 王玉堂.  中國水產(chǎn). 2018(09)
[5]銅綠假單胞菌OprL基因DNA疫苗的免疫效果[J]. 宮強,郭潔真,牛明福,阮夢蝶,杜珍奇.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2018(08)
[6]抗生素濫用的常見形式及合理用藥建議[J]. 徐莉,安怡,王正艷,華豐.  中國藥物經(jīng)濟學(xué). 2018(08)
[7]帶魚酶解蛋白亞鐵螯合物對泥鰍免疫特性的影響[J]. 林慧敏,袁寧,李穎杰,鄧尚貴,張賓,霍健聰.  水產(chǎn)學(xué)報. 2018(06)
[8]抗生素濫用的危害及與合理使用對策[J]. 徐心昱.  智能城市. 2016(07)
[9]溶藻弧菌雙組分調(diào)控系統(tǒng)KdpDE減毒活疫苗的構(gòu)建及其免疫效果評價[J]. 張燕飛,龐歡瑛,簡紀常,魯義善,湯菊芬,吳灶和.  水產(chǎn)學(xué)報. 2015(10)
[10]殼聚糖-海藻酸鹽復(fù)合微囊疫苗的制備及其對斜帶石斑魚的口服免疫效果[J]. 任燕,張小江,陶家發(fā),李寧求,石存斌,吳淑勤.  中國生物制品學(xué)雜志. 2015(02)



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