遲緩愛德華菌是水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中一種重要的病原菌,由遲緩愛德華菌引起的遲緩愛德華菌病不僅流行范圍廣、發(fā)病率和死亡率高,而且可造成多種魚類感染,引發(fā)魚類腹水、體表出血等癥狀,造成魚類的大量死亡,給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的損失。目前針對遲緩愛德華菌的檢測方法主要是通過傳統(tǒng)的細(xì)菌分離培養(yǎng),進(jìn)行細(xì)菌形態(tài)學(xué)和各項生理生化指標(biāo)的鑒定。此外還有分子生物學(xué)鑒定方法以及免疫學(xué)中的各種ELISA檢測方法。但是這些檢測方法由于需要專業(yè)檢測技能、昂貴的設(shè)備以及較長的檢測時間等原因而在實際應(yīng)用中受到很大的限制。以免疫膠體金技術(shù)建立起來的快速檢測試紙條,具有檢測快速、操作簡單的特點,是快速檢測遲緩愛德華菌的便捷有效手段。本研究中研發(fā)的遲緩愛德華菌膠體金免疫層析試紙條,是以30nm膠體金標(biāo)記抗遲緩愛德華菌單抗8H4-A3-B1為檢測探針,兔源多抗為捕獲抗體,利用雙抗夾心方法為技術(shù)核心研發(fā)的快速檢測遲緩愛德華菌的膠體金免疫層析試紙條。該試紙條特異性好,與美人魚弧菌ATCC33539、副溶血弧菌KCTC2471、創(chuàng)傷弧菌ATCC2126、溶藻弧菌KCCM40513、鰻弧菌KCTC2711、燦爛弧菌ATCC33125、希瓦氏菌KC... 

【文章來源】：大連海洋大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

膠體金顆粒帶電情況

可見度的免疫金銀染色法（IGSS），提高了靈敏度。1989年 Spie過檢測抗 HIV的斑點免疫金滲濾實驗，最初建立了斑點金免疫滲DIGFA）。1990年 Beggs 等[39]在免疫滲濾技術(shù)的基礎(chǔ)上建立了一速的檢測方法——膠體金免疫層析法（GICA），最先用于檢測血 HCG。隨著單克隆技術(shù)的成熟和納米技術(shù)的興起，免疫膠體金技[40-44]、畜牧獸醫(yī)、食品安全[45]、環(huán)境監(jiān)測[46, 47]等眾多領(lǐng)域得到廣2 膠體金的定義和性質(zhì)膠體金也稱金溶膠，是由金鹽被還原后形成的金顆粒懸液，它具的特性。膠體金由一個基礎(chǔ)金核及包圍在外的雙離子層構(gòu)成（如圖D Technology）。緊連金核表面的是內(nèi)層的負(fù)離子（AuCl2-），外在膠體間溶液中，以維持膠體金游離于溶膠間的懸液狀態(tài)。由于抗正電，因此可與膠體金顆粒發(fā)生偶聯(lián)（如圖 1-2）。

2.5 膠體金免疫層析試紙條的模式典型的膠體金免疫層析試紙條是由樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖膜）、吸水墊和 PVC 底板五部分組成（如圖 1-3所示）。試紙條次序為：首先將 PVC 底板置于底部，其上粘貼 NC膜，NC膜的兩金標(biāo)墊和吸水墊，銜接處需要有 3~5mm的重疊，便于毛細(xì)作用的樣品墊一般是采用玻璃纖維材質(zhì)，對樣品具有初步過濾，清用。金標(biāo)墊，又稱結(jié)合墊，上面噴涂金標(biāo)抗體，作為檢測抗原的上劃有 T、C兩道檢測線，靠近金標(biāo)墊的是 T線（檢測線），T線試劑，C線（質(zhì)控線）噴涂的是二抗，可檢測到未被 T線捕獲的金質(zhì)控作用。當(dāng)樣品墊上滴加一定量的樣品液后，由于毛細(xì)作用，通過金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜，經(jīng)過 T線、C 線到達(dá)吸水墊，通過 色情況可對抗原進(jìn)行定性或定量。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[3]應(yīng)用免疫膠體金技術(shù)對豬旋毛蟲病診斷方法的研究[D]. 任科研.吉林大學(xué) 2012
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本文編號：3411592