發(fā)布時間：2021-09-22 23:59

　　抗菌肽是由生物細胞特定基因編碼,經(jīng)過外界條件誘導(dǎo)產(chǎn)生的一類具有廣譜殺菌活性作用的多肽。近年來發(fā)現(xiàn)的新型抗菌肽hepcidin,在魚類中廣泛存在,主要是由生物體肝臟特異性表達的一種陽離子小分子多肽�？梢砸种贫喾N病毒、細菌、真菌和原生動物的生長繁殖,在魚類非特異性免疫中起重要作用,同時也可以作為一種信號分子,參與機體鐵代謝。本研究根據(jù)Gen Bank登錄的已知魚類抗菌肽hepcidin基因的保守區(qū)設(shè)計簡并引物,采用RT-PCR結(jié)合RACE的方法獲得淇河鯽（Qihe crucian carp Carassius auratus）hepcidin基因全長c DNA序列,并對基因序列及其編碼的多肽進行了結(jié)構(gòu)和系統(tǒng)進化分析。得到淇河鯽hepcidin c DNA全長708 bp,包含開放閱讀框（ORF）258bp,5′非翻譯區(qū)（5′-UTR）94 bp和3′非翻譯區(qū)（3′-UTR）356 bp,其中3′-UTR存在1個多聚腺苷酸加尾信號（AATAAA）和2個m RNA不穩(wěn)定基序（ATTTA）。開放閱讀框編碼一個85個氨基酸的成熟肽前體,由信號肽（24個氨基酸殘基）、前體肽（36個氨基酸殘基）和成熟... 

【文章來源】：河南師范大學河南省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語中英文對照表
第一章 魚類抗菌肽Hepcidin結(jié)構(gòu)特征與表達變化
    1.1 魚類hepcidin基因序列與結(jié)構(gòu)
    1.2 魚體內(nèi)hepcidin基因變體及其功能
        1.2.1 Hepcidin基因變體的功能差異性
        1.2.2 Hepcidin基因變體具組織表達特異性和抗菌選擇性
    1.3. 魚類hepcidin基因的表達調(diào)控
        1.3.1 病原刺激對Hepcidin表達的影響
        1.3.2 細胞鐵超載對Hepcidin表達的影響
        1.3.3 低氧和貧血對Hepcidin表達的影響
        1.3.4 魚類不同發(fā)育階段Hepcidin的表達變化
    1.4. Hepcidin研究展望
    研究的目的和意義
    技術(shù)路線圖
第二章 淇河鯽hepcidin基因cDNA全長的擴增及序列分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物及試劑
        2.1.2 主要實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 淇河鯽各組織樣品的準備與RNA提取
        2.2.2 Hepcidin cDNA中間片段的克隆及 5′和 3′端的擴增
        2.2.3 序列分析
    2.3 實驗結(jié)果與分析
        2.3.1 總RNA的提取鑒定
        2.3.2 淇河鯽hepcidin cDNA全長的克隆及鑒定
        2.3.3 淇河鯽hepcidin基因序列分析和比對
    2.4 討論
第三章 淇河鯽hepcidin基因?qū)毦捌漕愃莆锏谋磉_響應(yīng)
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗動物及試劑
        3.1.2 實驗儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 RNA的提取與保存
        3.2.2 淇河鯽各組織cDNA的制備
        3.2.3 引物設(shè)計及合成
        3.2.4 實時熒光定量PCR
    3.3 實驗結(jié)果與分析
        3.3.1 健康淇河鯽各組織hepcidin mRNA的組織分布
        3.3.2 淇河鯽腹腔注射嗜水氣單胞菌和LPS后hepcidin mRNA水平的變化
    3.4 討論
第四章 淇河鯽Hepcidin在大腸桿菌BL-21中的表達
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗菌株及試劑
        4.1.2 實驗儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 淇河鯽hepcidin ORF的PCR擴增及純化
        4.2.2 質(zhì)粒pET-32a(+)的提取及鑒定
        4.2.3 純化后PCR產(chǎn)物及質(zhì)粒pET-32a(+)的雙酶切與純化
        4.2.4 重組表達質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
        4.2.5 融合蛋白的誘導(dǎo)表達
        4.2.6 SDS-PAGE凝膠電泳檢測
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 淇河鯽hepcidin編碼區(qū)cDNA的PCR擴增及鑒定
    4.4 討論
結(jié)論
參考文獻
附錄A 主要試劑和溶液配制
致謝
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本文編號：3404615