遲緩愛德華氏菌EsaB/EsaL/EsaM調(diào)控Ⅲ型分泌系統(tǒng)輸送器蛋白和效應(yīng)分子的分泌
發(fā)布時(shí)間：2021-09-19 19:11
遲緩愛德華氏菌（Edwardsiella tarda）是一類感染宿主范圍廣泛的革蘭氏陰性致病菌,引起魚類的愛德華氏菌病,對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。Ⅲ型分泌系統(tǒng)（Type Ⅲ secretion system,T3SS）是細(xì)菌重要的毒力因子分泌系統(tǒng),細(xì)菌通過(guò)Ⅲ型分泌系統(tǒng)將毒力蛋白直接輸入宿主細(xì)胞,干擾正常的細(xì)胞活動(dòng),促進(jìn)細(xì)菌在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制和繁殖。本研究以遲緩愛德華氏菌Ⅲ型分泌系統(tǒng)調(diào)控蛋白EsaB/EsaL/EsaM為研究對(duì)象,圍繞EsaL如何控制Ⅲ型分泌系統(tǒng)底物分泌展開研究,為闡明遲緩愛德華氏菌Ⅲ型分泌系統(tǒng)的分子致病機(jī)理及研制弱毒疫苗奠定基礎(chǔ)。研究發(fā)現(xiàn)EsaL不是Ⅲ型分泌系統(tǒng)的分泌蛋白,其主要分布于細(xì)菌膜相。esaL缺失后,輸送器蛋白EseB/EseC/EseD分泌顯著減少,說(shuō)明EsaL促進(jìn)輸送器蛋白分泌。改變環(huán)境條件,如Ca2+濃度和pH,不影響EsaL對(duì)輸送器蛋白分泌的促進(jìn)作用。然而,EsaL對(duì)效應(yīng)分子分泌的控制作用隨環(huán)境因子改變而變化:當(dāng)Ca2+濃度增高或降低時(shí),EsaL不影響效應(yīng)分子的分泌;當(dāng)pH為酸性條件時(shí),EsaL促進(jìn)效應(yīng)分子分泌,中性條件下則不影響效應(yīng)分子的分泌。報(bào)道顯示...
【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：106 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
遲緩愛德華氏菌感染過(guò)程示意圖：1-4階段，胃腸炎；1-6階段，腸外感染（引自Leungetal2012）
錨定于外膜的蛋白 SctC 和錨定于內(nèi)膜的蛋白 SctD、SctJ 在(neck)接合(Marlovits et al 2004, Schraidt and Marlovits 2011)。SctC 形同的外環(huán)(outer ring, OR1 and OR2)；內(nèi)環(huán)也有兩個(gè)，SctD 和 SctJ 構(gòu)環(huán)(inner ring, IR1)，SctD 胞質(zhì)氨基端構(gòu)成最內(nèi)部環(huán)狀結(jié)構(gòu)(IR2) (Marll 2004)。SctC 與 II 型分泌系統(tǒng)分泌素(secretin)具有同源性(Michiels et al niga et al 1994)，和分泌素家族其他成員類似，SctC 也需要脂蛋白(lipopro助以正確定位和裝配(Crago and Koronakis 1998, Daefler and Russel 1rghout et al 2004)。SctD 和 SctJ 構(gòu)成內(nèi)膜環(huán)狀結(jié)構(gòu)(Marlovits et al 2004)自依靠一個(gè)跨膜螺旋錨定在膜上，此外，SctJ 脂化的氨基端也幫助其膜(Yip et al 2005)。位于基體中心的環(huán)狀內(nèi)腔結(jié)構(gòu)(inner rod)由 SctI 蛋Marlovits et al 2004)，此結(jié)構(gòu)為突出細(xì)胞外的針狀纖維(needle filament)作用。
遲緩愛德華氏菌 EsaB/EsaL/EsaM 調(diào)控 III 型分泌系統(tǒng)輸送器蛋白和效應(yīng)分子的分泌 PBS 洗滌后重懸于 Reagent 3 (Bio-Rad)。細(xì)胞質(zhì)相用三氯乙酸-丙酮集蛋白，重懸于 Reagent 3。膜相和質(zhì)相蛋白經(jīng) Bradford 法測(cè)定濃度等量蛋白”取樣、進(jìn)行 Western Blot。結(jié)果與分析 ΔesaL 缺失 EsaL 的 40-366 位氨基酸在 esaL 側(cè)翼序列設(shè)計(jì)引物擴(kuò)得 esaL-check 片段長(zhǎng) 941 bp，如圖 2.1 所選取 2-3 個(gè)克隆測(cè)序。Blast 序列比對(duì)結(jié)果表明 ΔesaL 缺失 118-1098 40-366 位氨基酸。ΔesaL 是正確合框的突變株。
本文編號(hào)：3402175
【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：106 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
遲緩愛德華氏菌感染過(guò)程示意圖：1-4階段，胃腸炎；1-6階段，腸外感染（引自Leungetal2012）
錨定于外膜的蛋白 SctC 和錨定于內(nèi)膜的蛋白 SctD、SctJ 在(neck)接合(Marlovits et al 2004, Schraidt and Marlovits 2011)。SctC 形同的外環(huán)(outer ring, OR1 and OR2)；內(nèi)環(huán)也有兩個(gè)，SctD 和 SctJ 構(gòu)環(huán)(inner ring, IR1)，SctD 胞質(zhì)氨基端構(gòu)成最內(nèi)部環(huán)狀結(jié)構(gòu)(IR2) (Marll 2004)。SctC 與 II 型分泌系統(tǒng)分泌素(secretin)具有同源性(Michiels et al niga et al 1994)，和分泌素家族其他成員類似，SctC 也需要脂蛋白(lipopro助以正確定位和裝配(Crago and Koronakis 1998, Daefler and Russel 1rghout et al 2004)。SctD 和 SctJ 構(gòu)成內(nèi)膜環(huán)狀結(jié)構(gòu)(Marlovits et al 2004)自依靠一個(gè)跨膜螺旋錨定在膜上，此外，SctJ 脂化的氨基端也幫助其膜(Yip et al 2005)。位于基體中心的環(huán)狀內(nèi)腔結(jié)構(gòu)(inner rod)由 SctI 蛋Marlovits et al 2004)，此結(jié)構(gòu)為突出細(xì)胞外的針狀纖維(needle filament)作用。
遲緩愛德華氏菌 EsaB/EsaL/EsaM 調(diào)控 III 型分泌系統(tǒng)輸送器蛋白和效應(yīng)分子的分泌 PBS 洗滌后重懸于 Reagent 3 (Bio-Rad)。細(xì)胞質(zhì)相用三氯乙酸-丙酮集蛋白，重懸于 Reagent 3。膜相和質(zhì)相蛋白經(jīng) Bradford 法測(cè)定濃度等量蛋白”取樣、進(jìn)行 Western Blot。結(jié)果與分析 ΔesaL 缺失 EsaL 的 40-366 位氨基酸在 esaL 側(cè)翼序列設(shè)計(jì)引物擴(kuò)得 esaL-check 片段長(zhǎng) 941 bp，如圖 2.1 所選取 2-3 個(gè)克隆測(cè)序。Blast 序列比對(duì)結(jié)果表明 ΔesaL 缺失 118-1098 40-366 位氨基酸。ΔesaL 是正確合框的突變株。
本文編號(hào)：3402175
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