本研究以我國(guó)重要的海洋經(jīng)濟(jì)魚類-大黃魚（Larimichthys crocea）作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,用RACE技術(shù)克隆獲得WD40重復(fù)家族成員wdr55、wdr73、wdr91,以及E3泛素連接酶的底物受體dcaf17基因的cDNA全長(zhǎng)（命名為L(zhǎng)c-wdr55、Lc-wdr73、Lc-wdr91、Lc-dcaf17）,采用熒光定量PCR技術(shù)研究了這些基因的組織的表達(dá)譜,以及不同發(fā)育階段精巢和卵巢中的表達(dá)差異,探討其在大黃魚性腺發(fā)育過程中的作用。結(jié)果如下:1、Lc-wdr55基因cDNA序列全長(zhǎng)1,849bp,其中開放閱讀框（ORF）1,233bp,編碼410個(gè)氨基酸,含有7個(gè)WD40結(jié)構(gòu)域、1個(gè)EWD盒子。Lc-wdr55在性腺的表達(dá)量顯著高于其他組織（P<0.05）、并在精巢的的表達(dá)量高于卵巢。不同發(fā)育階段卵巢與精巢Lc-wdr55的表達(dá)量都是成熟期最高,增殖期次之,排空期表達(dá)量最低（P<0.05）;顯示其與性腺發(fā)育與成熟有顯著的相關(guān)性。2、Lc-wdr73基因cDNA序列全長(zhǎng)1,706bp,其中ORF 1,406bp,編碼381個(gè)氨基酸,5’UTR51bp,3’UTR 509... 

【文章來源】：集美大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

WD40蛋白的空間結(jié)構(gòu)(引自Sprague等[84]

調(diào)節(jié)的關(guān)鍵分子。蛋白與 CRL4 E3 泛素連接酶的復(fù)合物的結(jié)構(gòu)及功能L4 的結(jié)構(gòu)研究解析主要如下：DDB1（ UV-damaged DNA為 127 kDa的蛋白質(zhì)，作為一個(gè)損傷DNA結(jié)合蛋白（DB）成員被發(fā)現(xiàn)，DDB1 蛋白由 3 個(gè)β-propeller結(jié)構(gòu)域組成是與CUL4 結(jié)合，BPA與BPC結(jié)構(gòu)域緊密聯(lián)系，作為底物的白的泛素化修飾來調(diào)控基因復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、修復(fù)及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等功CRL4 E3 泛素連接酶復(fù)合物的分子支架，氨基端結(jié)合DDB-E2 結(jié)合，使E2 與靶蛋白的空間互近，并將泛素共價(jià)結(jié)合到靶蛋白隨后由 26S蛋白酶體降解。結(jié)構(gòu)圖見圖 1-2。2006 年間報(bào)道稱發(fā)現(xiàn)了與DDB1-CUL4 相互作用的因子，他們各自-Cul4 associated factors）[95-98]。dcafs作為底物識(shí)別因子，后是WD40 蛋白，屬于WD40 家族，但是其中dcaf15、dcaf16、結(jié)構(gòu)，有待深究。

士研究生學(xué)位論文 大黃魚性腺相關(guān)基因的表達(dá)特性取大黃魚各組織的總 RNA 用 1%瓊脂糖凝膠電泳，由圖可見，由上到下、5S 三條帶，并且 28S、18S 條帶清晰，比例約 2：1，5S 條帶最弱（圖 測(cè) RNA 的 OD260/280 均處于 1.8-2.2 之間，OD260/230 在 2.0-2.5 之間，說整性和純度都較好，可以進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。定量所用 RNA 同樣符合條件。


本文編號(hào)：3389107