本文比較了胰酶消化法、網(wǎng)搓法和機械研磨法3種方法對獲得游離日本蟳精子的效果。對獲得的精子進行超低溫冷凍保存,用曙紅Y進行染色,檢測精子的存活率。使用7種不同稀釋液、不同濃度的二甲基亞砜（DMSO）、甘油（GLY）、1,2-丙二醇（PG）為抗凍保護劑,在6種不同的降溫程序下,對日本蟳精子進行超低溫冷凍保存,后在不同的溫度下解凍復(fù)蘇精子。實驗結(jié)果表明:3種精子獲取方法中以搓洗法的實驗效果最好,胰酶消化法的效果次之,最差的是機械研磨法。其中搓洗法中以500目的篩絹效果最好,精子密度達(dá)2.56×10¹³個/mL。日本蟳精子冷凍保存實驗結(jié)果表明,稀釋液以去鈣人工海水、抗凍保護劑以5%DMSO、平衡時間20 min、降溫程序P-1（0℃平衡20 min;-5℃/min降至-80℃;-80℃平衡5 min;-20℃/min降至-180℃;然后置于液氮中保存）,水浴解凍37.5℃的效果最好,精子存活率最高。 

【文章來源】：中國海洋大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2020,50(08)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

不同平衡時間對日本蟳精子超低溫冷凍保存的存活率

如圖4所示,程序1的冷凍保存效果最好,達(dá)84.53%;其次為程序3、程序2,精子的存活率分別為83.13%、82.41%。效果最差的是程序4,存活率僅為63.23%,其次是程序5、程序6,精子存活率為64.77%、66.88%。實驗結(jié)果表明,在精子超低溫冷凍保存中,在0～-80℃的降溫過程中需要一個緩沖的時間段。2.2.5 復(fù)蘇條件對日本蟳精子超低溫冷凍保存的影響

如圖5所示,不同復(fù)蘇條件下,凍精存活率效果最好的是水浴37.5 ℃,精子存活率可達(dá)87.83%,其次是35 ℃水浴解凍,存活率85.45%。40和30 ℃的效果較接近,分別為82.12%、80.22%。效果最差的是24 ℃室溫條件下的解凍,存活率為78.20%。3 討論

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3379596