草魚促腎上腺皮質激素釋放激素結合蛋白（CRH-BP）是37KDa的分泌糖蛋白,對CHR誘導的腦垂體促腎上腺皮質激素（Adernoocrtioctorpic Homrone,ACTH）的釋放起到抑制作用,在動物應激、妊娠反應、精神疾病中發(fā)揮了重要作用。本研究以草魚為材料,克隆了草魚CRH-BP基因的全長cDNA序列,對健康草魚的心、肝、脾、腎、頭腎、腦、皮、鰓8個組織進行了組織差異表達分析,對草魚在冷、熱應激條件下腦和頭腎的組織表達進行了分析。本文的主要研究結果如下：1、根據GenBank中魚類CRH-BP基因序列的保守區(qū)設計引物,擴增出草魚CRH-BP基因的部分序列。經克隆測序驗證為草魚CRH-BP基因的中間片段后,根據中間片段序列設計3’端和5’端特異性引物。通過RACE技術分別獲得草魚CRH-BP基因3’端和5’端序列,利用拼接技術得到CRH-BP基因全長cDNA序列。確定為目的基因后,再根據已知序列設計3"端和5’端特異性引物,分別進行3’RACE克隆和5’RACE克隆,經序列拼接獲得草魚CRH-BP基因全長cDNA序列。結果顯示CRH-BP基因cDNA全長為1324bp,開放閱... 

【文章來源】：湖南農業(yè)大學湖南省

【文章頁數】：48 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 CRH-BP基因的研究進展
        1.1.1 促腎上腺皮質激素釋放激素家族
        1.1.2 CRH-BP基因的克隆與表達
        1.1.3 CRH-BP在機體內的功能
        1.1.4 CRH-BP與魚類應激
    1.2 魚類應激與相關基因的研究進展
        1.2.1 應激的概念
        1.2.2 應激對魚體的影響
        1.2.3 應激相關基因
        1.2.4 免疫增強劑
    1.3 研究目的與意義
第二章 草魚CRH-BP基因cDNA全長克隆與序列分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 藥品及試劑
        2.1.3 主要實驗儀器設備
        2.1.4 引物設計
    2.2 實驗方法
        2.2.1 動物材料獲得
        2.2.2 總RNA的提取
        2.2.3 草魚CRH-BP基因cDNA中間片段的擴增
        2.2.4 草魚CRH-BP基因部分片段克隆
        2.2.5 CRH-BP 3'端和5'端片段擴增
        2.2.6 CRH-BP 3'端和5'端克隆、測序
        2.2.7 草魚CRH-BP基因全長cDNA序列拼接及分析
    2.3 結果與分析
        2.3.1 總RNA提取
        2.3.2 PCR擴增結果
        2.3.3 CRH-BP基因序列分析
        2.3.4 草魚CRH-BP氨基酸序列分析
    2.4 討論
第三章 草魚CRH-BP基因組織表達
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 藥品及試劑
        3.1.3 儀器設備
    3.2 實驗方法
        3.2.1 引物設計
        3.2.2 應激處理
        3.2.3 RNA提取
        3.2.4 半定量RT-PCR
        3.2.5 熒光定量PCR
    3.3 結果與分析
        3.3.1 RT-PCR測定正常情況下草魚各組織CRH-BP基因表達量
        3.3.2 勞光定量PCR檢測應激情況下草魚CRH-BP的表達情況
    3.4 討論
結論
參考文獻
致謝
作者簡介



本文編號：3376167