草魚促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素結(jié)合蛋白（CRH-BP）是37KDa的分泌糖蛋白,對CHR誘導(dǎo)的腦垂體促腎上腺皮質(zhì)激素（Adernoocrtioctorpic Homrone,ACTH）的釋放起到抑制作用,在動物應(yīng)激、妊娠反應(yīng)、精神疾病中發(fā)揮了重要作用。本研究以草魚為材料,克隆了草魚CRH-BP基因的全長cDNA序列,對健康草魚的心、肝、脾、腎、頭腎、腦、皮、鰓8個組織進行了組織差異表達分析,對草魚在冷、熱應(yīng)激條件下腦和頭腎的組織表達進行了分析。本文的主要研究結(jié)果如下：1、根據(jù)GenBank中魚類CRH-BP基因序列的保守區(qū)設(shè)計引物,擴增出草魚CRH-BP基因的部分序列。經(jīng)克隆測序驗證為草魚CRH-BP基因的中間片段后,根據(jù)中間片段序列設(shè)計3’端和5’端特異性引物。通過RACE技術(shù)分別獲得草魚CRH-BP基因3’端和5’端序列,利用拼接技術(shù)得到CRH-BP基因全長cDNA序列。確定為目的基因后,再根據(jù)已知序列設(shè)計3"端和5’端特異性引物,分別進行3’RACE克隆和5’RACE克隆,經(jīng)序列拼接獲得草魚CRH-BP基因全長cDNA序列。結(jié)果顯示CRH-BP基因cDNA全長為1324bp,開放閱... 

【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 CRH-BP基因的研究進展
        1.1.1 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素家族
        1.1.2 CRH-BP基因的克隆與表達
        1.1.3 CRH-BP在機體內(nèi)的功能
        1.1.4 CRH-BP與魚類應(yīng)激
    1.2 魚類應(yīng)激與相關(guān)基因的研究進展
        1.2.1 應(yīng)激的概念
        1.2.2 應(yīng)激對魚體的影響
        1.2.3 應(yīng)激相關(guān)基因
        1.2.4 免疫增強劑
    1.3 研究目的與意義
第二章 草魚CRH-BP基因cDNA全長克隆與序列分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 藥品及試劑
        2.1.3 主要實驗儀器設(shè)備
        2.1.4 引物設(shè)計
    2.2 實驗方法
        2.2.1 動物材料獲得
        2.2.2 總RNA的提取
        2.2.3 草魚CRH-BP基因cDNA中間片段的擴增
        2.2.4 草魚CRH-BP基因部分片段克隆
        2.2.5 CRH-BP 3'端和5'端片段擴增
        2.2.6 CRH-BP 3'端和5'端克隆、測序
        2.2.7 草魚CRH-BP基因全長cDNA序列拼接及分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 總RNA提取
        2.3.2 PCR擴增結(jié)果
        2.3.3 CRH-BP基因序列分析
        2.3.4 草魚CRH-BP氨基酸序列分析
    2.4 討論
第三章 草魚CRH-BP基因組織表達
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 藥品及試劑
        3.1.3 儀器設(shè)備
    3.2 實驗方法
        3.2.1 引物設(shè)計
        3.2.2 應(yīng)激處理
        3.2.3 RNA提取
        3.2.4 半定量RT-PCR
        3.2.5 熒光定量PCR
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 RT-PCR測定正常情況下草魚各組織CRH-BP基因表達量
        3.3.2 勞光定量PCR檢測應(yīng)激情況下草魚CRH-BP的表達情況
    3.4 討論
結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡介



本文編號：3376167