半滑舌鰨是一種在我國廣泛養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)魚類，本文以山東海陽工廠化養(yǎng)殖的半滑舌鰨為研究對象，利用多種分子生物學(xué)技術(shù)手段系統(tǒng)研究了半滑舌鰨Gadd45g基因的全長cDNA克隆，分析其基因序列的進(jìn)化性，較為系統(tǒng)的研究了基因在半滑舌鰨組織和性腺發(fā)育中的表達(dá)，成功將基因定位于半滑舌鰨染色體上。這些基礎(chǔ)性的研究資料將填補(bǔ)半滑舌鰨Gadd45g基因研究的空白，為揭示半滑舌鰨的性別決定機(jī)制奠定了基礎(chǔ)，對半滑舌鰨性別控制有積極地作用。1半滑舌鰨Gadd45g基因的克隆和功能分析本研究根據(jù)半滑舌鰨全基因組測序結(jié)果，利用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)和cDNA末端快速擴(kuò)增（RACE）技術(shù)，成功的在半滑舌鰨中克隆得到了3種Gadd45g基因的全長cDNA序列。Gadd45g1和Gadd45g2基因全長分別是1270bp和1181bp，都有480bp的開放閱讀框，分別編碼159個氨基酸殘基的蛋白，而Gadd45g3基因全長1147bp，編碼155個氨基酸。利用生物分析軟件和網(wǎng)站對基因編碼的氨基酸進(jìn)行比對分析，發(fā)現(xiàn)盡管他們均有保守結(jié)構(gòu)域，但Gadd45g1基因和Gadd45g2基因相似度高，與硬骨魚中的Gad... 

【文章來源】：中國海洋大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮略詞表
前言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 魚類性別決定
    2 Gadd45g 基因的研究進(jìn)展
    3 半滑舌鰨研究概況
        3.1 半滑舌鰨簡介
        3.2 半滑舌鰨研究進(jìn)展
    4 染色體熒光原位雜交
    5 本研究的目的與意義
第二章 Gadd45g 基因在半滑舌鰨中的克隆與功能分析
    1 材料
        1.1 實驗用魚
        1.2 主要試劑
        1.3 信息材料
        1.4 主要儀器
    2 方法
        2.1 樣品采集
        2.2 生理性別及遺傳性別鑒定
            2.2.1 生理性別的鑒定
            2.2.2 遺傳性別的鑒定
        2.3 組織中總 RNA 的提取
        2.4 cDNA 第一鏈的合成
        2.5 基因組序列片段在 cDNA 中驗證
            2.5.1 序列驗證引物的設(shè)計
            2.5.2 PCR 反應(yīng)驗證序列
            2.5.3 PCR 產(chǎn)物的純化
            2.5.4 目的片段的連接、轉(zhuǎn)化
            2.5.5 目的片段的測序
        2.6 RACE 反應(yīng)
            2.6.1 RACE-Ready cDNA 的合成：
            2.6.2 RACE 引物的設(shè)計
            2.6.3 兩步 PCR
            2.6.4 目的片段回收與測序
        2.7 序列拼接及理化性質(zhì)分析
        2.8 基因進(jìn)化分析
        2.9 半滑舌鰨 3 個 Gadd45g 同源基因的表達(dá)分析
            2.9.1 定量引物的設(shè)計
            2.9.2 半滑舌鰨 3 個 Gadd45g 同源基因的組織表達(dá)
            2.9.3 半滑舌鰨 3 個 Gadd45g 同源基因的在性腺發(fā)育中的表達(dá)
    3. 結(jié)果
        3.1 半滑舌鰨遺傳性別和生理性別的確定
        3.2 半滑舌鰨 Gadd45g 同源基因 cDNA 序列的克隆與序列分析
            3.2.1 半滑舌鰨 Gadd45g1 cDNA 序列的克隆與序列分析
            3.2.2 半滑舌鰨 Gadd45g2 cDNA 序列的克隆與序列分析
            3.2.3 半滑舌鰨 Gadd45g3 cDNA 序列的克隆與序列分析
        3.3 半滑舌鰨 3 種 Gadd45g 同源基因的氨基酸序列比對及系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建
        3.4 Gadd45g 同源基因間的 Ka/Ks 比值
            3.4.1 半滑舌鰨和其他硬骨魚中的 Gadd45g 型基因 Ka/Ks 比值
            3.4.2 半滑舌鰨 Gadd45g3 基因與其他同源基因 Ka/Ks 比值
        3.5 半滑舌鰨中 3 種 Gadd45g 同源基因的表達(dá)
            3.5.1 半滑舌鰨中 3 種 Gadd45g 同源基因在成魚各組織中的表達(dá)
            3.5.2 半滑舌鰨中 3 種 Gadd45g 基因在偽雄魚性腺中的表達(dá)
            3.5.3 半滑舌鰨中 3 種 Gadd45g 同源基因在仔魚性腺發(fā)育各時期中的表達(dá)
    4 討論
        4.1 半滑舌鰨中 3 種 Gadd45g 同源基因的結(jié)構(gòu)與序列分析
        4.2 半滑舌鰨 3 種 Gadd45g 基因的適應(yīng)性進(jìn)化分析
            4.2.1 半滑舌鰨 Gadd45g1 和 Gadd45g2 基因的適應(yīng)性進(jìn)化分析
            4.2.2 半滑舌鰨 Gadd45g3 基因的適應(yīng)性進(jìn)化分析
        4.3 半滑舌鰨中 3 種 Gadd45g 基因的表達(dá)分析
            4.3.1 半滑舌鰨中 3 種 Gadd45g 基因的組織表達(dá)分析
            4.3.2 半滑舌鰨中 3 種 Gadd45g 基因的性腺表達(dá)分析
            4.3.3 半滑舌鰨 3 種 Gadd45g 基因的仔魚性腺表達(dá)及功能分析
第三章 半滑舌鰨 Gadd45g 基因的染色體熒光定位
    1 材料
        1.1 實驗用魚及文庫
        1.2 主要儀器
        1.3 主要試劑
    2 方法
        2.1 半滑舌鰨相關(guān)基因的 FISH 引物設(shè)計
        2.2 基因在半滑舌鰨 BAC 文庫中的篩選定位
            2.2.1 基因在一級混合池中的篩選
            2.2.2 二級池的構(gòu)建
            2.2.3 質(zhì)粒的提取
            2.2.4 基因在二級池中的篩選
            2.2.5 目的基因在 BAC 文庫陽性克隆的驗證
        2.3 BAC 克隆在染色體中的 FISH 定位
            2.3.1 標(biāo)記探針的制備
            2.3.2 染色體標(biāo)本的制備
            2.3.3 探針與染色體雜交
            2.3.4 雜交后洗脫和鏡檢
    3 結(jié)果
        3.1 基因在半滑舌鰨 BAC 文庫中的位置
            3.1.1 3 個基因在半滑舌鰨 BAC 文庫板池的檢出
            3.1.2 3 個基因在半滑舌鰨 BAC 文庫二級池的檢出
        3.2 染色體和探針成功制備
        3.3 BAC 克隆在染色體中的定位
    4 討論
        4.1 半滑舌鰨 BAC-FISH 技術(shù)體系
        4.2 Gadd45g 基因在半滑舌鰨染色體上的位置
參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡歷
發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[2]四種細(xì)胞色素P450酶在半滑舌鰨繁殖生理機(jī)能中的作用研究[D]. 陳彩芳.中國海洋大學(xué) 2010
[3]利用熒光原位雜交技術(shù)（FISH）對中國明對蝦和櫛孔扇貝若干重要基因定位的研究[D]. 郇聘.中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所） 2009

碩士論文
[1]半滑舌鰨性別相關(guān)基因DAZL和WT1a的克隆與表達(dá)分析[D]. 張紅.中國海洋大學(xué) 2013
[2]半滑舌鰨養(yǎng)殖群體遺傳性別和表型性別研究[D]. 梁卓.上海海洋大學(xué) 2012
[3]SublyticC5b-9誘導(dǎo)Gadd45γ表達(dá)對Thy-1腎炎GMCs凋亡病變的影響[D]. 車楠.南京醫(yī)科大學(xué) 2009
[4]基于邊緣檢測的圖像去噪方法在二維條碼識別中的研究與應(yīng)用[D]. 劉大偉.中國海洋大學(xué) 2008



本文編號：3349804