Th17細(xì)胞作為一類CD4⁺效應(yīng)T細(xì)胞,以其分泌白細(xì)胞介素17（IL-17）而著名。由于Th17細(xì)胞在自身免疫、宿主防御、腸炎及腫瘤等生理或病理過程中發(fā)揮重要作用,IL-17的產(chǎn)生及生物學(xué)功能受到愈來愈多的重視。在哺乳動物中,IL-17可以通過誘導(dǎo)趨化因子募集單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞并將它們靶向到粘膜表面,同時誘導(dǎo)能夠直接殺死入侵病原菌的抗菌肽產(chǎn)生,為宿主防御做出了重要貢獻(xiàn)。相應(yīng)地,魚類IL-17的生物學(xué)功能也得到了初步鑒定,如課題組已證明草魚IL-17A/F1可以誘導(dǎo)多種細(xì)胞因子的表達(dá),特別是通過誘導(dǎo)CXCL8招募免疫細(xì)胞,提示草魚IL-17A/F1發(fā)揮了類似的宿主防御功能。但是,魚類IL-17A/F1分泌產(chǎn)生的特征和機(jī)制還未見報道。為此,本論文以草魚頭腎白細(xì)胞（Head Kidney Leukocytes,HKLs）為細(xì)胞模型,經(jīng)IL-21、IL-6、IL-1β和TGF-β1等細(xì)胞因子處理,研究草魚中IL-17A/F1的表達(dá)分泌特征和機(jī)制。結(jié)果顯示,TGF-β1可以抑制IL-17A/F1的基因表達(dá),而IL-21、IL-6和IL-1β均能時間依賴... 

【文章來源】：電子科技大學(xué)四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 Th17細(xì)胞的起源及其重要功能
        1.1.1 輔助性T(Th)細(xì)胞簡介
        1.1.2 Th17細(xì)胞的特征性細(xì)胞因子及其功能
        1.1.3 哺乳動物中誘導(dǎo)Th17細(xì)胞分化的關(guān)鍵因子
    1.2 IL-17家族成員及其免疫功能
        1.2.1 IL-17的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 IL-17的家族成員
        1.2.3 IL-17受體家族
        1.2.4 IL-17的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與免疫相關(guān)功能
    1.3 硬骨魚中Th17細(xì)胞及IL-17家族的研究進(jìn)展
    1.4 本文研究意義及內(nèi)容
第二章 草魚頭腎白細(xì)胞中細(xì)胞因子調(diào)節(jié)IL-17A/F1及其受體的基因表達(dá)和相關(guān)信號通路
    2.1 實驗材料
    2.2 實驗方法與操作
        2.2.1 草魚頭腎白細(xì)胞(HKLs)的分離及培養(yǎng)
        2.2.2 不同細(xì)胞因子和信號通路抑制劑處理HKLs
        2.2.3 總RNA提取
        2.2.4 cDNA模板的制備
        2.2.5 實時熒光定量PCR
        2.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    2.3 實驗結(jié)果分析
        2.3.1 IL-21對草魚IL-17A/F1及其受體IL-17RA、IL-17RCmRNA表達(dá)的影響和相關(guān)信號通路
        2.3.2 IL-6刺激草魚IL-17A/F1及其受體IL-17RA、IL-17RCmRNA的表達(dá)和相關(guān)信號通路
        2.3.3 IL-1β誘導(dǎo)IL-17A/F1及其受體IL-17RA、IL-17RCmRNA的表達(dá)分析和相關(guān)信號通路
        2.3.4 TGF-β1抑制IL-17A/F1及其受體IL-17RA、IL-17RCmRNA的表達(dá)
    2.4 討論
第三章 不同細(xì)胞因子的聯(lián)合作用對草魚頭腎白細(xì)胞中IL-17A/F1基因表達(dá)的影響
    3.1 實驗材料
    3.2 實驗方法與操作
        3.2.1 草魚頭腎白細(xì)胞(HKLs)的分離及培養(yǎng)
        3.2.2 使用不同的細(xì)胞因子處理HKLs
        3.2.3 RNA提取及cDNA模板的制備
        3.2.4 實時熒光定量PCR
        3.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    3.3 實驗結(jié)果分析
        3.3.1 IL-21與IL-1β的聯(lián)合作用對IL-17A/F1基因表達(dá)的影響
        3.3.2 IL-21與TGF-β1的聯(lián)合作用對IL-17A/F1基因表達(dá)的影響
    3.4 討論
第四章 不同細(xì)胞因子處理和體內(nèi)外炎癥條件下草魚IL-17A/F1的分泌檢測
    4.1 實驗材料
        4.1.1 IL-17A/F1菌株
        4.1.2 實驗中主要溶液的配制
        4.1.3 草魚
    4.2 實驗方法與操作
        4.2.1 IL-17A/F1重組蛋白的真核表達(dá)與純化
        4.2.2 草魚IL-17A/F1多克隆抗體的制備
        4.2.3 蛋白質(zhì)免疫印跡法
        4.2.4 利用棋盤法建立草魚IL-17A/F1競爭-抑制酶連免疫吸附實驗方法
        4.2.5 草魚頭腎淋巴細(xì)胞(HKLs)的分選及培養(yǎng)
        4.2.6 使用不同的細(xì)胞因子處理HKLs
        4.2.7 嗜水氣單胞菌的培養(yǎng)
        4.2.8 嗜水氣單胞菌感染草魚
        4.2.9 ELISA方法檢測IL-17A/F1的分泌
        4.2.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    4.3 實驗結(jié)果分析
        4.3.1 草魚IL-17A/F1多克隆抗體具有特異性
        4.3.2 草魚IL-17A/F1競爭-抑制酶連免疫吸附實驗方法建立
        4.3.3 不同細(xì)胞因子處理對草魚頭腎白細(xì)胞分泌IL-17A/F1的影響
        4.3.4 體內(nèi)外炎癥條件下草魚IL-17A/F1的分泌
    4.4 討論
第五章 結(jié)論與展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士期間取得的研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]IL-17的信號傳導(dǎo)及功能研究[J]. 施沛青,朱書,錢友存.  中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報. 2011(04)



本文編號：3336819