哈維氏弧菌（Vbrio harveyi）是水產養(yǎng)殖業(yè)中一種常見的條件致病菌,可導致多種水產養(yǎng)殖品種大量死亡,造成巨大的經濟損失。傳統(tǒng)的富集培養(yǎng)以及分子生物學檢測方法操作復雜且檢測時間較長,無法應用于基層單位現(xiàn)場檢測。因此,迫切需要建立一種快速、簡單的方法對V.harveyi進行監(jiān)測,以便在病害暴發(fā)早期采取有效措施,減少經濟損失。本課題基于單克隆抗體制備技術,開發(fā)一種快速檢測V.harveyi的方法。首先,以甲醛滅活的V.harveyi作為免疫原制備用于檢測的單克隆抗體。分別采用PEG融合和電融合兩種方法進行細胞融合。經篩選及亞克隆后,成功獲得兩株可特異性分泌抗V.harveyi單克隆抗體的雜交瘤細胞4D9和2B9。將篩選獲得的雜交瘤細胞注入小鼠腹腔誘導腹水的產生,以蛋白G純化腹水獲得單克隆抗體,經亞型鑒定兩種抗體均為IgG1。其次,制備25 nm膠體金顆粒用于純化的單克隆抗體標記。最后,進行兩種抗V.harveyi單克隆抗體的配對試驗并進行免疫層析試紙條的制備。由于兩種單抗亞型相同,很可能針對相同抗原決定簇,不能同時應用于夾心法制備試紙條。因此,改用一種單克隆抗體與V.hareyi多克... 

【文章來源】：華東理工大學上海市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．２膠體金結構示意圖??Ｆｉｇ．?１．２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｏｆ?ｃｏｌｌｏｉｄａｌ?ｇｏｌｄ．??

Ｆｉｇ．?１．３?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｔｈｅ?Ｉｎｄｉｒｅｃｔ?Ｄｏｔ－ＰＰＡ?ＥＬＩＳＡ?ｔｅｓｔ［５２］．??１．４．２斑點雜交法基本結構??斑點雜交法操作簡單、經濟、靈敏度高，且結構簡單（圖１．４），主要以點樣方式??將樣品固定于不同膜上，然后用于檢測。在檢測核酸分子時，尼龍膜對核酸分子的敏感??性較ＮＣ膜高［５１］。Ｗａｎｇ等通過實驗比較發(fā)現(xiàn)ＮＣ膜和ＰＶＤＦ在檢測準確性上相同，均??可用作樣品吸附基質，但基于ＮＣ膜價格便宜且無需預處理，目前ＮＣ膜的應用更為普??ＨＲＰ??〇底物??「?二抗??’?－抗??，抗原）??ｉ?￣?；?■；?－?＿?Ｊ??硝酸纖維素膜??圖１．４斑點雜交法結構圖??Ｆｉｇ．?１．４?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｏｆ?ｄｏｔ?ｂｌｏｔ．??

??圖１．３斑點雜交檢測原理圖％??Ｆｉｇ．?１．３?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｔｈｅ?Ｉｎｄｉｒｅｃｔ?Ｄｏｔ－ＰＰＡ?ＥＬＩＳＡ?ｔｅｓｔ［５２］．??１．４．２斑點雜交法基本結構??斑點雜交法操作簡單、經濟、靈敏度高，且結構簡單（圖１．４），主要以點樣方式??將樣品固定于不同膜上，然后用于檢測。在檢測核酸分子時，尼龍膜對核酸分子的敏感??性較ＮＣ膜高［５１］。Ｗａｎｇ等通過實驗比較發(fā)現(xiàn)ＮＣ膜和ＰＶＤＦ在檢測準確性上相同，均??可用作樣品吸附基質，但基于ＮＣ膜價格便宜且無需預處理，目前ＮＣ膜的應用更為普??ＨＲＰ??〇底物??「?二抗??’?－抗??，抗原）??ｉ?￣?；?■；?－?＿?Ｊ??硝酸纖維素膜??圖１．４斑點雜交法結構圖??Ｆｉｇ．?１．４?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｏｆ?ｄｏｔ?ｂｌｏｔ．??


本文編號：3321170