為了鑒定貴州芩鞏縣某養(yǎng)殖場(chǎng)草魚發(fā)病死亡的病原,本研究通過臨床解剖觀察、細(xì)菌分離培養(yǎng)、革蘭氏染色鏡檢、生化鑒定、藥敏試驗(yàn)、動(dòng)物回歸試驗(yàn)、16S rDNA與gyr B基因測(cè)序及系統(tǒng)分析進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示,本研究從發(fā)病草魚體內(nèi)分離到1株致病菌GZQG2019,分離菌在培養(yǎng)基中呈圓形、表面濕潤光滑、邊緣整齊半透明的灰白色菌落,菌落周圍呈現(xiàn)β-溶血環(huán);革蘭氏鏡檢顯示,分離菌呈兩端鈍圓短小陰性桿菌;16S rDNA、gyr B基因序列分析顯示,分離菌與維氏氣單胞菌聚為一支,同源性均在99%以上;藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示,在使用的20種抗菌藥物中,該菌對(duì)四環(huán)素、丁胺卡那、多黏菌素B和頭孢曲松等10種藥物敏感,對(duì)苯唑西林、青霉素、阿莫西林和慶大霉素等8種藥物中度敏感,對(duì)頭孢氨芐、復(fù)方新諾明2種藥物耐藥;動(dòng)物回歸試驗(yàn)顯示,該菌對(duì)健康草魚具有強(qiáng)致病性;10種毒力基因擴(kuò)增結(jié)果顯示,分離菌攜帶氣溶素、熱不穩(wěn)定性腸毒素、溶血素、核酶、絲氨酸蛋白酶、彈性蛋白酶和酯酶7種毒力基因。本試驗(yàn)成功分離到1株草魚源維氏氣單胞菌,具有較強(qiáng)毒力,且攜帶多種毒力因子;對(duì)四環(huán)素、丁胺卡那等藥物敏感,對(duì)四環(huán)素、丁胺卡那等耐藥,為維氏氣單胞菌... 

【文章來源】：中國畜牧獸醫(yī). 2020,47(03)北大核心

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圖1 分離菌株β-溶血環(huán)

圖1 分離菌株β-溶血環(huán)表2 分離菌株生化反應(yīng)結(jié)果Table 2 Biochemical test results of the isolated strain 項(xiàng)目Items 結(jié)果Results 項(xiàng)目Items 結(jié)果Results 3% NaCl胨水 3% NaCl peptone water + 1% NaCl甘露醇 1% NaCl mannitol + 6% NaCl胨水 6% NaCl peptone water - 1% NaCl阿拉伯膠 1% NaCl arabic gum + 8% NaCl胨水 8% NaCl peptone water - 1% NaCl肌醇 1% NaCl inositol - 10% NaCl胨水 10% NaCl peptone water - 1% NaCl賴氨酸 1% NaCl lysine + 1% NaCl 氨基酸對(duì)照 1% NaCl amino acid control - 1% NaCl葡萄糖 1% NaCl glucose + 1% NaCl精氨酸雙水解酶1% NaCl arginine dihydrolase + 1% NaCl葡磷胨水(VP)1% NaCl peptone water (VP) - 1% NaCl 精氨酸雙水解酶對(duì)照1% NaCl arginine dihydrolase control + 1% NaCl蛋白胨水(靛基質(zhì))1% NaCl peptone water (indigo matrix) + 無鹽胨水 No salt peptone water + 1% NaCl蔗糖 1% NaCl sucrose + +，陽性；-，陰性+,Positive;-,Negative

采用16S rDNA通用引物和gyr B基因特異性引物對(duì)分離菌株GZQG2019進(jìn)行PCR擴(kuò)增,產(chǎn)物經(jīng)純化后連接pMD19-T載體測(cè)序,16S rDNA通用引物擴(kuò)增后獲得大小為1 424 bp的序列,gyr B基因特異性引物擴(kuò)增后獲得大小為742 bp的序列(圖3)。將測(cè)序結(jié)果與GenBank中參考菌株16S rDNA及gyr B基因序列進(jìn)行同源性比對(duì),發(fā)現(xiàn)分離菌株GZQG2019的16S rDNA和gyr B基因與維氏氣單胞菌同源性均>99%。采用Mega 7.0軟件對(duì)分離菌株與參考菌株16S rDNA及gyr B基因序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹,結(jié)果顯示,菌株GZQG2019均與維氏氣單胞菌聚為一支(圖4、5)。結(jié)合分離菌株GZQG2019的形態(tài)觀察、生理生化特性鑒定、16S rDNA及gyr B基因序列分析,最終可判定分離菌株GZQG2019為維氏氣單胞菌。圖4 分離菌株與參考株16S rDNA基因序列系統(tǒng)進(jìn)化樹

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]斑點(diǎn)叉尾鮰源致病性維氏氣單胞菌的分離與生物學(xué)特性鑒定[J]. 田浪,溫貴蘭,張升波,楊佰啟,李昌紅,徐麗,林漢卿,管國丹.  中國畜牧獸醫(yī). 2018(11)
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[6]錦鯽致病性維氏氣單胞菌的分離鑒定及耐藥性分析[J]. 賈俊鵬,康元環(huán),張冬星,陳龍,孫武文,張賀亮,崔冰冰,單曉楓,錢愛東.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2018(01)
[7]羅非魚豎鱗病病原維氏氣單胞菌的分離鑒定與致病性研究[J]. 韋陽道,楊軍,文衍紅,司徒玲,劉霞,易弋.  中國畜牧獸醫(yī). 2016(11)
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碩士論文
[1]草魚出血性疾病病原體的鑒定、致病性及免疫防治研究[D]. 曹笑楠.河南師范大學(xué) 2018



本文編號(hào)：3320197