Dynamin（發(fā)動(dòng)蛋白）是一類具有鳥苷三磷酸酶（GTPase）活性的超家族蛋白,可以影響膜重構(gòu)（membrane remodeling）,在細(xì)胞內(nèi)吞、膜泡運(yùn)輸、膜分裂融合等過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）隸屬節(jié)肢動(dòng)物門（Arthropod）、甲殼綱（Crustacea）、十足目（Decapoda）、方蟹科（Grapsidae）,是我國具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的蟹類養(yǎng)殖品種之一。雄性中華絨螯蟹精子發(fā)生過程涉及細(xì)胞質(zhì)胞吐、核形變、頂體形成等事件,Dynamin在這一多步驟的細(xì)胞分化過程中的表達(dá)、分布特征及所發(fā)揮的功能尚不明確,值得深入探討。本研究利用分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等技術(shù)方法,分析Dynamin蛋白在雄性中華絨螯蟹精子發(fā)生過程中的表達(dá)特征及該家族蛋白對(duì)精子形態(tài)、頂體發(fā)生的影響和可能存在的作用機(jī)制。研究結(jié)果為Dynamin家族蛋白在中華絨螯蟹精子發(fā)生過程中的表達(dá)特征提供了理論數(shù)據(jù);為揭示Dynamin蛋白在中華絨螯蟹雄性生殖細(xì)胞發(fā)育過程中的作用奠定基礎(chǔ);也為該家族蛋白在其他甲殼動(dòng)物中的相關(guān)研究提供借鑒。通過免疫印跡、免疫熒光技術(shù)探究經(jīng)典Dynamin（Dyn... 

【文章來源】：河北大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Dynamin組裝成螺旋管狀聚合物[6]

河北大學(xué)碩士學(xué)位論文2圖1-2Dynamin介導(dǎo)的網(wǎng)格蛋白包被膜泡形成示意圖[17]Fig.1-2ModelofDynamin-mediatedclathrin-coatedvesicleformation隨著研究的深入發(fā)現(xiàn)，Dynamin及其相關(guān)蛋白不僅僅參與網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用，實(shí)際上它們是維持正常細(xì)胞生命活動(dòng)、生理功能過程的重要因子，如參與細(xì)胞器（如線粒體）的融合與分裂，突觸傳導(dǎo)，神經(jīng)通路調(diào)控，肌肉收縮，甚至與微絲、微管的功能有關(guān)[18-20]。也有大量證據(jù)表明，Dynamin及其相關(guān)蛋白在致癌方面也有發(fā)揮作用[21-23]。然而，該家族蛋白在與生殖系統(tǒng)有關(guān)的作用方面的研究還有很大的局限。1.1.1Dynamin家族蛋白Dynamin家族蛋白都包含其主要功能區(qū)域GTPase結(jié)構(gòu)域。該家族蛋白與其他鳥苷酸水解酶不同的是，Dynamin中的GTPase活性是相互依賴的，而且GTP親和能力較低，并且都能與質(zhì)膜結(jié)合。目前，在哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)Dynamin由3個(gè)不同的基因即DNM1、DNM2、DNM3編碼，將這3個(gè)亞型蛋白（Dyn1、Dyn2、Dyn3）合稱為經(jīng)典Dynamin。雖然該類蛋白基因所編碼的蛋白結(jié)構(gòu)域約有80%的相似度，但是它們都有各自的表達(dá)模式。在哺乳動(dòng)物中，最初的研究認(rèn)為Dyn1選擇性地在神經(jīng)系統(tǒng)中高度表達(dá)；Dyn2廣泛存在于各種組織細(xì)胞；Dyn3主要分布于睪丸、內(nèi)臟器官等。除了經(jīng)典Dynamin，人類Dynamin蛋白超家族還包括類Dynamin蛋白（Dynamin-likeproteins），Mx蛋白（Mxproteins），線粒體融合蛋白（mitofusins）和GBP/ATL相關(guān)蛋白（GBP/atlastinrelatedproteins）等。后續(xù)又發(fā)現(xiàn)，在果蠅和線蟲等較低等的生物中也有Dynamin同源蛋白存在[11,14]。

河北大學(xué)碩士學(xué)位論文6屬于一種相對(duì)保守的基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制。如圖1-4，將dsRNA導(dǎo)入細(xì)胞時(shí)，Dicer會(huì)識(shí)別并將其剪切成siRNA小片段。或者可以直接將體外制備合成的siRNA片段引入細(xì)胞。與RISC結(jié)合的siRNA有義鏈會(huì)被降解而解旋成單鏈[68]，剩余的反義鏈識(shí)別相應(yīng)的mRNA。激活的RISC-siRNA復(fù)合物特異地結(jié)合靶標(biāo)mRNA，從而將其切斷并分解導(dǎo)致基因表達(dá)沉默[69]。圖1-4RNA干擾現(xiàn)象的機(jī)理[69]Fig.1-4MechanismofRNAinterferencephenomenon關(guān)于RNAi的具體作用機(jī)制，一般認(rèn)為主要包括3個(gè)階段：起始階段、效應(yīng)階段和倍增階段。（1）起始階段：導(dǎo)入細(xì)胞的dsRNA與Dicer酶特異性結(jié)合，此時(shí)dsRNA會(huì)被剪切成長度為21～23bp的siRNA[70]。（2）效應(yīng)階段：小片段siRNA識(shí)別RISC并將其激活；被激活的RISC則會(huì)解旋siRNA為單鏈，此過程需要ATP供能。已成單鏈的siRNA引導(dǎo)活化型的RISC去尋找與之互補(bǔ)的mRNA鏈，靶向結(jié)合內(nèi)源mRNA后將其進(jìn)行特異性分解，使得mRNA鏈被完全破壞。該作用過程中反義鏈?zhǔn)紫群突パa(bǔ)的mRNA相互結(jié)合，然后在距離siRNA3’末端12個(gè)堿基處將mRNA切斷并降解，進(jìn)而阻斷目的基因的表達(dá)并使該基因表達(dá)沉默

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]糖原合成酶激酶3在精子成熟、獲能和頂體反應(yīng)中的作用[J]. 屈夏,王昊,周家豪,趙紫薇,劉強(qiáng).  國際生殖健康/計(jì)劃生育雜志. 2017(04)
[2]中華絨螯蟹蛻皮抑制激素多克隆抗體的制備及其表達(dá)分泌特征的組織學(xué)研究[J]. 張鳳娟,曹佳培,王鵬,穆淑梅,康現(xiàn)江.  河北大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2015(03)
[3]突觸內(nèi)吞關(guān)鍵蛋白Dynamin的研究進(jìn)展[J]. 蔡婷,袁偉.  中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2014(10)
[4]精子功能相關(guān)的蛋白質(zhì)調(diào)控受精過程的研究進(jìn)展[J]. 陳志林,馮美瑩,陳預(yù)明,衛(wèi)恒習(xí),李莉,吳同山,張守全.  遺傳. 2014(08)
[5]Dynamin在胞吞中的研究進(jìn)展[J]. 柳林,李照玉,紀(jì)偉.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2012(01)
[6]鋸緣青蟹精子低溫冷藏及精子活力的染色法評(píng)價(jià)[J]. 管衛(wèi)兵,王桂忠,李少菁,陳高峰.  臺(tái)灣海峽. 2002(04)
[7]蟹類精子超微結(jié)構(gòu)的比較研究[J]. 堵南山,賴偉,陳立僑,薛魯征,李太武,王蘭.  動(dòng)物學(xué)研究. 1999(05)
[8]中華絨螯蟹精子的研究——Ⅰ.精子的形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)[J]. 堵南山,賴偉,薛魯征.  海洋與湖沼. 1987(02)
[9]中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）精子頂體反應(yīng)的研究[J]. 堵南山,賴偉,薛魯征.  動(dòng)物學(xué)報(bào). 1987(01)

碩士論文
[1]大GTP酶Dynamin 2在卵母細(xì)胞成熟和早期胚胎發(fā)育過程中的調(diào)控作用[D]. 王翹楚.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]Dynamin蛋白在內(nèi)毛細(xì)胞突觸囊泡內(nèi)吞作用及其與聽力的關(guān)系[D]. 蔡婷.第三軍醫(yī)大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3306133