殺魚愛德華氏菌（Edwardsiella spicicida）之前又稱遲緩愛德華氏菌,是海水養(yǎng)殖業(yè)的重要致病菌,可感染牙鲆、大菱鲆和羅非魚等多種重要經(jīng)濟(jì)水產(chǎn)動(dòng)物,嚴(yán)重影響了我國海水養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。截止到目前,有關(guān)殺魚愛德華氏菌的致病機(jī)制還尚未完全了解。鐵是殺魚愛德華氏菌引發(fā)宿主致病所不可或缺的,然而,在宿主體內(nèi)大部分鐵以血紅素的形式存在,自由鐵很少,因此,利用血紅素釋放鐵的血紅素?cái)z取系統(tǒng)在殺魚愛德華氏菌引發(fā)宿主致病過程中扮演著至關(guān)重要的作用。在前期對(duì)殺魚愛德華氏菌組學(xué)研究中發(fā)現(xiàn),一個(gè)注釋為血紅素利用蛋白的基因很可能參與了細(xì)菌的抗逆性和致病性。為了進(jìn)一步探究和明確該基因的功能,本研究以殺魚愛德華氏菌血紅素利用蛋白HutZEp為對(duì)象,通過對(duì)HutZEp的功能檢測(cè)及其受鐵吸收調(diào)控因子（Ferric uptake regulator,Fur）的調(diào)控作用分析,闡述HutZEp在殺魚愛德華氏菌抗逆和致病過程中的作用及其受調(diào)控機(jī)制,為殺魚愛德華氏菌的防治提供理論支撐。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:（1）HutZEp蛋白結(jié)構(gòu)功能分析。生物信息學(xué)分析表明HutZEp是一個(gè)與血紅素利用相關(guān)的蛋白,它與大腸桿菌... 

【文章來源】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－７．酸性條件下ＴＸＯｌ和ＴＸＯｌ?Ａ／７Ｗ／Ｚ生長分析

ｌ?ａｎｄ?ＴＸＯ?丨?ＡＡＫ／Ｚｍｏｂｉｌｉｔｙ．??２．３．８／７ＷＺ＆對(duì)殺魚愛德華氏菌抗宿主血清殺菌能力的影響??為了檢測(cè)ＡｗｒＺ￡／７是否在殺魚愛德華氏菌抵抗宿主血清殺傷中起作用，將野生??株株ＴＸ０１和突變株ＴＸ０１Ａ；ｍ？Ｚ與未免疫牙鲆血清（或ＰＢＳ）在２３°Ｃ培養(yǎng)箱中??孵育１?ｈ，結(jié)果如２－１０?ａ圖所示，野生株ＴＸ０１平均存活率為７７．０％，而突變株??ＴＸ０１Ａ／ｍ（Ｚ平均存活率只有５７．３％；?ＲＴ－ｑＰＣＲ檢測(cè)在正常和血清壓力條件下??印基因的表達(dá)情況，結(jié)果如圖２－１０?ｂ所示，／２加Ｚ辦在血清壓力條件下的表達(dá)??量是正常條件下表達(dá)量的２．５倍。上述結(jié)果表明在殺魚愛德華氏菌抵抗宿??主血清殺菌能力方面起著關(guān)鍵作用。??ａ?□?ＴＸＯｌ?ｂ??＾?ｉｎｎ?Ｈｉ?ＴＸ０＼ＡｈｕｔＺ?ｃ?＾￣１?＊＊??色?ＥＥＯ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?？§?Ｔ??ａｌ?２－?＿??Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｓｅｒｕｍ??圖２－１０．?ＴＸＯｌ和ＴＸ０１Ａ／ｗ？Ｚ抗血清殺菌能力及血清壓力下Ａ？／Ｚ印的表達(dá)量。??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１０．?ＴＸＯｌ?ａｎｄ?ＴＸＯｌ?Ａ／？ｚ／／Ｚ?ａｎｔｉ－ｓｅｒｕｍ?ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ?ａｂｉｌｉｔｙ?ａｎｄ?ｈｕｔＺＥｐ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｕｎｄｅｒ?ｓｅｒｕｍ?ｐｒｅｓｓｕｒｅ．??圖注：ａ：血清殺菌：ｂ：?ＲＴ－ｑＰＣＲ?分析。Ｌｅｇｅｎｄ：?ａ?：ｓｅｒａ?ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ；?ｂ：ＲＴ－ｑＰＣＲ?ａｎａｌｙｓｉｓ．??Ｂ１??

?河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位（畢業(yè)）論文???２．３．９如泛辦對(duì)殺魚愛德華氏菌細(xì)胞粘附及胞內(nèi)繁殖能力的影響??從上述實(shí)驗(yàn)得知／ｍ？Ｚ辦的缺失對(duì)殺魚愛德華氏菌的抗逆性方面（生物膜形成??能力、運(yùn)動(dòng)能力及抵抗宿主血清殺菌等）有著重要的影響，但的生理作用??還尚未確定。通過體外侵染細(xì)胞和體內(nèi)侵染牙鲆組織實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步評(píng)估；ｎ＾Ｚ￡ｐ在殺??魚愛德華氏菌致病機(jī)制中的作用。??為了檢測(cè)是否在殺魚愛德華氏菌與宿主細(xì)胞相互作用中起作用，我們??進(jìn)行了細(xì)胞粘附能力檢測(cè)，結(jié)果如圖２－１１?ａ圖所示，無論粘附ｌｈ還是２ｈ，突??變株ＴＸＯｌＡ／ｗ／Ｚ的粘附能力均弱于野生株ＴＸＯＩ。??根據(jù)己有數(shù)據(jù)顯示，殺魚愛德華氏菌能夠在宿主細(xì)胞中存活和繁殖為??了研究／ｍ？Ｚ辦是否在殺魚愛德華氏菌胞內(nèi)繁殖能力方面起作用，將ＴＸ０１和??ＴＸＯｌＡ／ｕｄＺ與ＦＧ細(xì)胞一起孵育２ｈ，慶大霉素處理后，繼續(xù)孵育不同時(shí)間，通??過平板計(jì)數(shù)來研究野生株ＴＸ０１和突變株ＴＸＯＩＡ／＾Ｚ的胞內(nèi)繁殖能力，結(jié)果如??圖２－ｌｌｂ所示，在Ｏｈ時(shí)，二者胞內(nèi)存活數(shù)量差不多，隨著侵染時(shí)間的增加，雖??然二者胞內(nèi)存活能力均有提高，但突變株ＴＸＯｌＡ／ｎｚ這的胞內(nèi)存活能力遠(yuǎn)低于野??生株ＴＸ０１，在侵染８ｈ時(shí)最顯著。??綜上所述，／ｍ／Ｚ印的缺失明顯削弱了殺魚愛德華氏菌對(duì)宿主細(xì)胞的粘附和胞??內(nèi)繁殖能力。??ａ?３?□?ＴＸ０１?ｂ?□?ＴＸ〇１??■?ＴＸＯｌＭｗｆＺ?■?ＴＸＯ＼ＮｉｕｔＺ?．ｊｌ??Ｔ?８－??＾２＂?＊?－〇?６－??Ｎ—？?丁?ｉ－Ｈ??Ｊｌ—Ｈ．．．?ＩＩ?．．．．〇，？?（１１Ｕ??１?ｈ?２ｈ?Ｏｈ?２ｈ?４ｈ?８ｈ??圖２－１１

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3305717