凡納濱對蝦翻譯控制腫瘤蛋白基因的克隆及其在對蝦原代培養(yǎng)細胞中的表達研究
發(fā)布時間：2021-07-22 19:23
盡管國內外學者們在對蝦細胞建系上進行了大量的探索和不懈的努力，但對蝦細胞培養(yǎng)技術目前仍處于原代培養(yǎng)水平，永生性細胞系一直未成功建立。而對蝦永生性細胞系的建立對于研究對蝦病毒的致病機理和制備病毒疫苗等具有重要科學意義。在哺乳動物細胞中，致癌基因的過表達可成功實現(xiàn)細胞的永生性轉化。翻譯控制腫瘤蛋白（TCTP）是一種重要的細胞生長相關蛋白，具有促進細胞生長、抗凋亡和重編程作用。因此，本文擬克隆凡納濱對蝦的TCTP基因，構建真核表達載體，并通過脂質體法將其轉染到對蝦原代培養(yǎng)細胞中，過表達，分析其在對蝦細胞的永生性轉化中的作用，為對蝦細胞的永生性轉化奠定技術基礎。本文首先通過RT-PCR技術成功克隆得到凡納濱對蝦TCTP基因編碼框的cDNA全長，長度為507bp，編碼168個氨基酸。以報告質粒pCX-eGFP為模板，PCR擴增得到加強型綠色熒光蛋白（eGFP）基因編碼框。然后，以BamHI和EcoRI雙酶切將TCTP基因定向插入真核表達質粒pcDNA3.1/V5-HisA，構建得到pcDNA3.1-TCTP重組質粒；以KpnI和BamHI雙酶切將eGFP基因定向插入到pcDNA3.1-TCTP重...
【文章來源】：中國海洋大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：98 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
TCTP蛋白結構示意圖(A)及其與Mss4結構(B)的比較
34 的 PCR 擴增產(chǎn)物的瓊脂擴增片段。phoresis analysis of PCer. A: Amplifying fragme行測序（華大基因公司v/）上進行序列比對，與。Lv-TCTP 基因的核酸和編碼 168 個氨基酸。
圖 2-3 Lv-TCTP 基因的核酸和氨基酸序列分析結果。Fig.2-3 Analysis of the nucleic acid and amino acid sequences of Lv-TCTP gene.3.2 去終止密碼子的加強型綠色熒光蛋白（eGFP）基因片段克隆及其序列分析以 pCX-eGFP 質粒為模板，以 eGFP 特異性引物，進行 eGFP 基因 ORF（去TAA）的 PCR 擴增，對其 PCR 擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測的結果如圖 2-3所示，約在 750 bp 處，有一條清晰的 PCR 產(chǎn)物條帶，該條帶的大小和 eGFP ORF的長度相符合。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]南美白對蝦TCTP基因表達分析[J]. 黃華根,沈文英,吳文林. 泉州師范學院學報. 2013(02)
[2]申克孢子絲菌翻譯控制腫瘤蛋白的結構分析與功能預測[J]. 黃懷球,鐘毅,趙靜,張靜,孫九峰,張曉輝,袁立燕. 中山大學學報(醫(yī)學科學版). 2012(04)
[3]凡納濱對蝦翻譯控制腫瘤蛋白Fortilin的畢赤酵母表達及其對血細胞免疫反應的影響[J]. 周怡,張文兵,麥康森. 中國海洋大學學報(自然科學版). 2012(Z1)
[4]CMV啟動子與艾美耳球蟲基因側翼序列對黃色熒光蛋白表達調控作用的研究[J]. 李繼東,丁林軍,何生虎. 江西農(nóng)業(yè)大學學報. 2009(06)
[5]Cloning, Expression and Characterization of Translationally Controlled Tumor Protein （TCTP） Gene from Flatfish Turbot （Scophthalmus maximus）[J]. WANG Jian, GUO Huarong, ZHANG Shicui, YIN Licheng, GUO Bin, and WANG Shaojie College of Marine Life Sciences, Ocean University of China, Qingdao 266003, P. R. China. Journal of Ocean University of China. 2008(02)
[6]EGFP基因在中國明對蝦原代培養(yǎng)細胞中的導入和表達[J]. 張曉軍,余黎明,李富花,相建海. 中國生物工程雜志. 2006(02)
[7]s-lap/GFP融合蛋白在Hela細胞中的表達與定位[J]. 宋憶淑,宋志宇,費向東,賀冰,李玉新. 吉林大學學報(醫(yī)學版). 2005(01)
[8]中國對蝦淋巴組織的長期原代培養(yǎng)和化學誘變初探[J]. 郎剛華,王勇,汪岷,陳西廣. 青島海洋大學學報(自然科學版). 2001(03)
[9]牙鲆鰓細胞與中國對蝦淋巴細胞雜交細胞的體外培養(yǎng)[J]. 樊廷俊,史振平. 水產(chǎn)學報. 2001(01)
本文編號：3297746
【文章來源】：中國海洋大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：98 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
TCTP蛋白結構示意圖(A)及其與Mss4結構(B)的比較
34 的 PCR 擴增產(chǎn)物的瓊脂擴增片段。phoresis analysis of PCer. A: Amplifying fragme行測序（華大基因公司v/）上進行序列比對，與。Lv-TCTP 基因的核酸和編碼 168 個氨基酸。
圖 2-3 Lv-TCTP 基因的核酸和氨基酸序列分析結果。Fig.2-3 Analysis of the nucleic acid and amino acid sequences of Lv-TCTP gene.3.2 去終止密碼子的加強型綠色熒光蛋白（eGFP）基因片段克隆及其序列分析以 pCX-eGFP 質粒為模板，以 eGFP 特異性引物，進行 eGFP 基因 ORF（去TAA）的 PCR 擴增，對其 PCR 擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測的結果如圖 2-3所示，約在 750 bp 處，有一條清晰的 PCR 產(chǎn)物條帶，該條帶的大小和 eGFP ORF的長度相符合。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]南美白對蝦TCTP基因表達分析[J]. 黃華根,沈文英,吳文林. 泉州師范學院學報. 2013(02)
[2]申克孢子絲菌翻譯控制腫瘤蛋白的結構分析與功能預測[J]. 黃懷球,鐘毅,趙靜,張靜,孫九峰,張曉輝,袁立燕. 中山大學學報(醫(yī)學科學版). 2012(04)
[3]凡納濱對蝦翻譯控制腫瘤蛋白Fortilin的畢赤酵母表達及其對血細胞免疫反應的影響[J]. 周怡,張文兵,麥康森. 中國海洋大學學報(自然科學版). 2012(Z1)
[4]CMV啟動子與艾美耳球蟲基因側翼序列對黃色熒光蛋白表達調控作用的研究[J]. 李繼東,丁林軍,何生虎. 江西農(nóng)業(yè)大學學報. 2009(06)
[5]Cloning, Expression and Characterization of Translationally Controlled Tumor Protein （TCTP） Gene from Flatfish Turbot （Scophthalmus maximus）[J]. WANG Jian, GUO Huarong, ZHANG Shicui, YIN Licheng, GUO Bin, and WANG Shaojie College of Marine Life Sciences, Ocean University of China, Qingdao 266003, P. R. China. Journal of Ocean University of China. 2008(02)
[6]EGFP基因在中國明對蝦原代培養(yǎng)細胞中的導入和表達[J]. 張曉軍,余黎明,李富花,相建海. 中國生物工程雜志. 2006(02)
[7]s-lap/GFP融合蛋白在Hela細胞中的表達與定位[J]. 宋憶淑,宋志宇,費向東,賀冰,李玉新. 吉林大學學報(醫(yī)學版). 2005(01)
[8]中國對蝦淋巴組織的長期原代培養(yǎng)和化學誘變初探[J]. 郎剛華,王勇,汪岷,陳西廣. 青島海洋大學學報(自然科學版). 2001(03)
[9]牙鲆鰓細胞與中國對蝦淋巴細胞雜交細胞的體外培養(yǎng)[J]. 樊廷俊,史振平. 水產(chǎn)學報. 2001(01)
本文編號：3297746
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