尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）隸屬于鱸形目（Percifomes）、麗魚科（Cichlidae），為聯(lián)合國糧農(nóng)組織向世界各國推薦的養(yǎng)殖對(duì)象，現(xiàn)已成為中國重要的養(yǎng)殖魚類品種。但近年來養(yǎng)殖羅非魚暴發(fā)了鏈球菌病，導(dǎo)致羅非魚的大量死亡，威脅著我國羅非魚養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展，因此很有必要開展羅非魚免疫防御機(jī)制的研究。γ-干擾素是調(diào)控天然免疫和細(xì)胞免疫的一種重要的細(xì)胞因子，除了具有抗病毒作用外，干擾素還參與到其他重要的生理反應(yīng)中，如調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長、分化、凋亡及免疫反應(yīng)等，近年的研究發(fā)現(xiàn)干擾素中的γ-干擾素還具有顯著的抗菌作用。本研究克隆了尼羅羅非魚γ-干擾素基因，實(shí)時(shí)定量PCR檢測了其在無乳鏈球菌感染前后各組織和器官中的表達(dá)，以了解γ-干擾素基因在尼羅羅非魚免疫防御過程中的作用；同時(shí)以斑馬魚作為轉(zhuǎn)基因研究模型，評(píng)估金魚Tgf2轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)在轉(zhuǎn)基因魚研制上應(yīng)用的可行性，并應(yīng)用于構(gòu)建轉(zhuǎn)基因羅非魚。主要研究內(nèi)容如下：1.尼羅羅非魚γ-干擾素基因的克隆與表達(dá)特性分析。本研究從尼羅羅非魚脾臟組織中擴(kuò)增到γ-干擾素基因的cDNA，其大小為690bp，開放閱讀框?yàn)?21bp，推測編碼206個(gè)... 

【文章來源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

尼羅羅非魚γ-干擾素基因蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)的預(yù)測與抗原性分析

根據(jù) γ-干擾素基因編碼氨基酸序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹顯示，尼羅羅非魚先與斜帶石斑魚聚類，再與大西洋鮭魚和虹鱒聚類 (圖 1-3) 。圖1-3 尼羅羅非魚與其他魚類γ-干擾素基因的系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig.1-3 Phylogenetic tree based on γIFN gene of O.niloticus and other teleosts3.3 用于 qRT-PCR 的尼羅羅非魚內(nèi)參基因的篩選分別以正常和受感染的尼羅羅非魚的各組織 cDNA 為模板，檢測 18s rRNA、EF1α 和 β-actin 3 個(gè)內(nèi)參基因在各組織中的表達(dá)。分別用 normFinder 和 geNorm 軟件進(jìn)行分析，結(jié)果顯示 3 個(gè)內(nèi)參基因中，18s rRNA 基因的表達(dá)最穩(wěn)定，可作為下一步 qRT-PCR 分析的內(nèi)參基因（圖 1-4）。表1-4 尼羅羅非魚與其他魚類 γ- 干擾素基因氨基酸序列的相似性Tab.2-4 Amino acid identity of γIFNgenes of O. niloticusand other teleosts

上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文22圖1-4 尼羅羅非魚內(nèi)參基因的篩選Fig.1-4 Selection of reference gene of O.niloticus3.4 正常尼羅羅非魚γ-干擾素基因的組織表達(dá)實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 分析 γ-干擾素基因在正常尼羅羅非魚 9 個(gè)組織中的表達(dá)差異，結(jié)果顯示尼羅羅非魚 γ-干擾素的 mRNA 在脾臟中表達(dá)量最高，其次是腸、鰓和腎，在心臟、肌肉和皮膚組織中的表達(dá)量最低（圖 1-5）。圖 1-5 γ-干擾素基因 mRNAs 在不同組織中的差異表達(dá)以 18s rRNA 基因?yàn)閮?nèi)參基因，計(jì)算各組織表達(dá)量與表達(dá)量最低組織的表達(dá)量的倍數(shù)：標(biāo)注相同字母的，表示柱間差異不顯著；標(biāo)注不同字母的，表示柱間差異顯著(P <0.05)。Fig. 1-5 Tissue distribution of the γIFN mRNAs of O.niloticus measured by qRT-PCR. Expressionvalues were normalized to those of 18s rRNA gene. Data are expressed as the mean fold change(means ±S.E., n = 6) from the calibrator group. Bars with different letters indicate statisticaldifferences (P < 0.05).3.5 感染無乳鏈球菌后尼羅羅非魚 γ-干擾素基因的組織表達(dá)變化qRT-PCR 檢測受無乳鏈球菌感染后，尼羅羅非魚 γ-干擾素基因在各組織中的表達(dá)差異。結(jié)果顯示，感染后 6h

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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