信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白（signal transducer and activator of transcription,STAT）是一類重要的轉(zhuǎn)錄因子,在生物體內(nèi)發(fā)揮著多種生物學(xué)功能。截止到目前為止,關(guān)于文昌魚STAT的相關(guān)研究還未見報(bào)道。因此,本論文以白氏文昌魚（Branchiostoma belcheri）的STAT家族基因?yàn)檠芯繉?duì)象,通過分子克隆、實(shí)時(shí)定量、Co-IP等分子生物學(xué)手段及生物信息學(xué)方法對(duì)白氏文昌魚STAT家族基因的進(jìn)化、功能及作用機(jī)制進(jìn)行研究,得到了以下幾個(gè)方面的結(jié)果:1.通過RT-PCR、RACE技術(shù)擴(kuò)增了白氏文昌魚STAT家族基因序列（將它們分別命名為AmphiSTATa和AmphiSTATb）,其中AmphiSTA Ta的cDNA全長為3901 bp,其中5’UTR片段大小為140 bp,ORF片段大小為273 bp,3’UTR片段大小為1022 bp;AmphiSTATb的cDNA全長為3878 bp,其中5’UTR片段大小為173 bp,ORF片段大小為2436 bp,3’UTR片段大小為1269 bp。2.序列保守性及結(jié)構(gòu)分析顯示:AmphiSTATa... 

【文章來源】：南京師范大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

總RNA瓊脂糖凝膠電泳條帶Figure2.1AgarosegelelectrophoresisladderoftotalRNA

第二章白氏文昌魚AmphiSTATa和AmphiSTATb基因的克隆及生物信息學(xué)分析22隆片段也位于2000bp-3000bp之間（圖2.2C，F(xiàn)）。我們將所得到的PCR片段分別連接到T-VectorpMD19（Simple）載體上后測(cè)序，將得到的所有測(cè)序結(jié)果去掉5"RACE和3"RACE的末端通用引物后，我們得到AmphiSTATa基因的中間PCR片段大小為2739bp（圖2.2B）；AmphiSTATa基因的5"RACE克隆片段PCR產(chǎn)物大小為807bp（圖2.2A）；AmphiSTATa基因的3"RACE克隆片段PCR產(chǎn)物大小為2075bp（圖2.2C）；AmphiSTATb基因的中間PCR片段大小為2436bp（圖2.2E）；AmphiSTATb基因的5"RACE克隆片段PCR產(chǎn)物大小為327bp（圖2.2D）；AmphiSTATb基因的3"RACE克隆片段PCR產(chǎn)物大小為2471bp（圖2.2F）。使用DNAMAN軟件分別將每個(gè)基因的5"RACE片段、中間片段、3"RACE片段進(jìn)行拼接后得到AmphiSTATa和AmphiSTATb基因的全長（圖2.3）。最終的拼接結(jié)果顯示，AmphiSTATa基因的cDNA總長為3901bp，其中5’UTR片段大小為140bp，ORF片段大小為2739bp，3’UTR片段大小為1022bp（圖2.3A），編碼912aa；AmphiSTATb基因的cDNA總長為3878bp，其中5’UTR片段大小為173bp，ORF片段大小為2436bp，3’UTR片段大小為1269bp（圖2.3B），編碼811aa。圖2.2AmphiSTATaandAmphiSTATb瓊脂糖凝膠電泳條帶Figure2.2AgarosegelelectrophoreticbandsofAmphiSTATaandAmphiSTATb

第二章白氏文昌魚AmphiSTATa和AmphiSTATb基因的克隆及生物信息學(xué)分析23圖2.3AmphiSTATa和AmphiSTATbcDNA全長示意圖。AmphiSTATacDNA全長（A）和AmphiSTATbcDNA全長（B）由5’UTR，ORF和3’UTR三部分組成。黑色線段代表UTR區(qū)域，方框代表ORF區(qū)域。Figure2.3TheAmphiSTATaandAmphiSTATbcDNAfull-lengthstructureschematicdiagram.TheAmphiSTATacDNAfull-length(A)andtheAmphiSTATbcDNAfull-length(B)werecomposedofthreeparts-the5’UTR,ORFand3’UTR.TheblacklineindicatedtheUTRregion.TheboxindicatedtheORFregion.2.3.3AmphiSTATa和AmphiSTATb蛋白序列分析通過蛋白序列分析顯示，文昌魚AmphiSTATa和AmphiSTATb蛋白均包含N-terminal結(jié)構(gòu)域、STAT5Coiled-coil結(jié)構(gòu)域、DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域及SH2結(jié)構(gòu)域。其中STAT5Coiled-coil結(jié)構(gòu)域?yàn)镾TAT5亞家族特異的結(jié)構(gòu)域，而我們的預(yù)測(cè)結(jié)果表明AmphiSTATa和AmphiSTATb蛋白所對(duì)應(yīng)的結(jié)構(gòu)域均為STAT5Coiled-coil結(jié)構(gòu)域，因此我們確定AmphiSTATa和AmphiSTATb與STAT5亞家族同源性更高（圖2.4）。圖2.4AmphiSTATa、AmphiSTATb和STAT家族成員蛋白結(jié)構(gòu)域示意圖。Figure2.4TheproteindomainofAmphiSTATa,AmphiSTATbandotherSTATfamilymembers.2.3.4AmphiSTATa和AmphiSTATb蛋白序列同源性分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]轉(zhuǎn)基因JAK3體外長期擴(kuò)增T淋巴祖細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 趙聲明,顧惜春,常乃柏,許曉東,彭明婷.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 2006(24)



本文編號(hào)：3289948