大刺鰍（Mastacembelus armatus）屬于合鰓目（Symbranchiformes）刺鰍科（Mastacembelidae）刺鰍屬（Mastacembelus）。近年來由于捕撈過度,野生大刺鰍群體逐漸萎縮。有關人工養(yǎng)殖大刺鰍研究方面的報道較少,對大刺鰍生長內(nèi)部分子機制的研究尚未見報道,為了進一步提高大刺鰍的應用價值,為后續(xù)大刺鰍全人工繁育增加基礎數(shù)據(jù),本實驗,使用同源克隆和RACE法克隆了大刺鰍生長相關基因（ghrh、gh、igf-1、igf-2、mstn）,研究了這些基因在大刺鰍組織、胚胎和胚后發(fā)育時期的表達情況。同時研究了在體注射不同濃度的大刺鰍GHRH多肽、LHRH-A2及RNA干擾ghrh對ghrh、gh、igf-1、igf-2、mstn m RNA表達的影響。為闡明大刺鰍各生長基因之間的調(diào)控機制奠定了理論基礎。主要結果如下:1.大刺鰍ghrh、gh、igf-1、igf-2、mstn基因c DNA全長分別是1090 bp、815bp、2989 bp、1446 bp、2690 bp,開發(fā)閱讀框（ORF）分別為429 bp、615 bp、558 bp、648 bp、1... 

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大刺鰍雌雄個體形態(tài)

廣州大學碩士論文6圖1-2生長的內(nèi)分泌調(diào)控軸與其他內(nèi)分泌調(diào)控軸調(diào)控網(wǎng)絡交互作用簡圖（引自代向燕等，2014）Fig.1-2Interactionbetweentheendocrineregulatoryaxisofgrowthandtheregulatorynetworkofotherendocrineregulatoryaxes(FormDaixiangyan,2014)1.2.1促生長激素釋放激素（GHRH）促生長激素釋放激素（Growthhormonereleasinghormone,GHRH）是由動物下丘腦分泌的一類多肽類物質(zhì)，F(xiàn)rohman等（1981）最先是在胰腺癌組織中分離得到。GHRH主要生物學功能是刺激垂體細胞合成、分泌GH。其不僅對動物的生長和發(fā)育發(fā)揮著非常重要的調(diào)控作用，同時對動物新陳代謝調(diào)控具有一定的作用（Mayoetal.,2000）。在胚胎發(fā)育過程中，GHRH對細胞增殖分化和腦垂體形成等也有重要的作用(Billestrupetal.,1986)。在哺乳動物中，GHRH成熟多肽是由44個氨基酸構成，而在魚類中則由27個氨基酸構成，魚類GHRHcDNA最先通過基因克隆技術在金魚（Carassiusauratus）和斑馬魚（Daniorerio）中獲得（代向燕等，2014）。有研究表明：魚類GHRH成熟多肽和人類的GHRH成熟多肽具有81.5%同源性（Leeetal.,2007）。在哺乳動物中，GHRH還具有促進傷口愈合、促進細胞增殖、調(diào)控細胞分化、調(diào)節(jié)睡眠周期等非垂體依賴型的生理功能（Kiarisetal.,2011）。魚類GHRH的功能與哺乳動物GHRH功能類似，主要是刺激垂體GH分泌釋放、調(diào)節(jié)免疫功能以及性別差異生長等（代向燕等，2014）。

廣州大學碩士論文10圖1-3MSTN/Smad信號通路簡圖（引自楊揚，2018）Fig.1-3SignalpathofMSTN/Smad(formYangyang,2018)1.3魚類RNA干擾技術研究進展RNA干擾（RNAinterference,RNAi）是指動植物體內(nèi)基因的mRNA受雙鏈RNA（doublestrandRNA,dsRNA）誘導發(fā)生特異性降解，從而導致轉(zhuǎn)錄后產(chǎn)生基因沉默（posttranscriptionalgenesilencing,PTGS）的現(xiàn)象（Elbashiretal.,2001;黃秀蘭等，2008）。近年來，在水產(chǎn)經(jīng)濟動物研究中，RAN干擾技術是研究魚類生長調(diào)節(jié)上下游基因調(diào)控機理重要實驗方法。1.3.1RNA干擾的原理及作用機制RNA干擾首先通過核糖核酸酶III（Dicer）切割dsRNA生成21～23nt的小干擾RNA（smallinterferenceRNA,siRNA），接著由siRNA識別同源靶基因mRNA并對其進行靶向降解，從而達到抑制同源靶基因的蛋白表達的目的（黃秀蘭等，2008韓林強等，2009）。目前對于RNA干擾的機制，多數(shù)研究者都支持轉(zhuǎn)錄后機制，也就是dsRNA通過促進靶基因mRNA降解從而抑制靶基因的表達（孫慶輝，2016）。整個過程大致可以分為3個階段，分別是起始階段、效應階段和擴增階段。具體過程如圖1-4所示。1.3.2RNA干擾技術在魚類中的應用RNA干擾技術在魚類中的研究主要集中基因功能、抗病毒、抗寄生蟲等方

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]大刺鰍（Mastacembelus armatus）繁殖生物學研究[D]. 周惠強.廣州大學 2019
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[3]華南及鄰近地區(qū)不同群體大刺鰍的遺傳多樣性及親緣地理研究[D]. 江小璐.廣州大學 2018
[4]大刺鰍（Mastacembelus armatus）微衛(wèi)星標記開發(fā)及野生群體遺傳多樣性分析[D]. 林婷婷.廣州大學 2017
[5]黃河裸裂尻魚MSTN基因RNA干擾研究[D]. 孔慶輝.青海大學 2016
[6]星突江鰈生長激素和胰島素樣生長因子的生理功能及體外重組研究[D]. 臧坤.上海海洋大學 2014
[7]花鱸類胰島素生長因子及結合蛋白基因的克隆與表達調(diào)控[D]. 錢焜.中國海洋大學 2013
[8]JNK在斑馬魚個體發(fā)育中的功能研究[D]. 熊振.湖南師范大學 2012
[9]斑馬魚性腺發(fā)育相關基因的表達與分析[D]. 田佳.集美大學 2010



本文編號：3270533