【目的】深入了解克氏原螯蝦先天免疫過程中抗菌肽的作用與功能,豐富先天免疫中抗菌肽的理論知識(shí),為克氏原螯蝦的病害機(jī)理研究及防控措施制定提供參考依據(jù)。【方法】從克氏原螯蝦肝胰腺組織提取總RNA,利用PCR擴(kuò)增crustin5基因全長(zhǎng)cDNA序列,運(yùn)用DNAMAN 6.0、ProtParam、ProtScale、SOPMA和SWISS-MODEL等在線軟件對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析,并以實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)crustin5基因在克氏原螯蝦各組織中的表達(dá)情況�！窘Y(jié)果】克氏原螯蝦crustin5基因cDNA序列全長(zhǎng)954 bp,開放閱讀框（ORF）為429 bp,共編碼167個(gè)氨基酸殘基,其編碼蛋白相對(duì)分子量為16485.42 Da,理論等電點(diǎn)為8.58,為不穩(wěn)定的疏水性蛋白。克氏原螯蝦crustin5蛋白具有典型的crustins家族結(jié)構(gòu)特征,包括N端的信號(hào)肽,C端的WAP結(jié)構(gòu)域,以及二者間的半胱氨酸富集區(qū);其二級(jí)結(jié)構(gòu)中α-螺旋、β-轉(zhuǎn)角、無(wú)規(guī)則卷曲和延伸鏈分別占20.36%、7.78%、58.08%和13.77%。crustin5基因在克氏原螯蝦血細(xì)胞、肝胰腺、鰓、腸道、肌肉和淋巴器官等6種組... 

【文章來(lái)源】：南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2020,51(04)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【部分圖文】：

克氏原螯蝦crustin5基因的PCR擴(kuò)增電泳結(jié)果

重組質(zhì)粒pET-28a-crustin5轉(zhuǎn)化BL21(DE3）感受態(tài)細(xì)胞后，篩選出陽(yáng)性克隆送至生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行測(cè)序，結(jié)果表明，克氏原螯蝦crustin5基因cDNA序列全長(zhǎng)954 bp，開放閱讀框（ORF）為429 bp，共編碼167個(gè)氨基酸殘基（圖3）。crustin5蛋白具有典型的crustins家族結(jié)構(gòu)特征，包括N端的信號(hào)肽（圖中紅色字體部分），C端的WAP結(jié)構(gòu)域（灰色區(qū)域部分），以及二者間的半胱氨酸富集區(qū)。2.4 crustin5氨基酸序列同源性分析結(jié)果

根據(jù)NCBI中的BLAST對(duì)比分析結(jié)果，挑選出與克氏原螯蝦物種相近、基因序列同源性較高的crustin氨基酸序列，并利用DNAMAN 6.0進(jìn)行多序列對(duì)比分析，結(jié)果（圖4）發(fā)現(xiàn)，克氏原螯蝦crustin5氨基酸序列與斑節(jié)對(duì)蝦Pm-crustin5氨基酸序列、小褐美對(duì)蝦Fs-crustin氨基酸序列、圣保羅對(duì)蝦Fp-crustin氨基酸序列、日本對(duì)蝦Pj-crustin2氨基酸序列、日本對(duì)蝦Pj-crustin4氨基酸序列和中國(guó)對(duì)蝦Fc-crustin氨基酸序列的同源性分別為28.65%、27.27%、26.86%、25.71%、23.46%和21.39%，與遠(yuǎn)海梭子蟹Pp-crustin氨基酸序列、鋸緣青蟹Ss-crustin氨基酸序列、紫螯青蟹St-crustin氨基酸序列和中華絨螯蟹Es-crustin1氨基酸序列的同源性分別為19.41%、18.24%、17.65%和17.34%。2.5 系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹分析結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]擬穴青蟹抗菌肽Crustin新變體的表達(dá)特性與抗菌功能[J]. 王曉飛,彭會(huì),陳芳奕,張財(cái)亮,黃文樹.  廈門大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2019(03)
[2]凡納濱對(duì)蝦抗菌肽crunstinA在畢赤酵母菌中的表達(dá)[J]. 馬春霞,彭金霞,何蘋萍,雷愛瑩,馬寧,王瑞,黎銘.  南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2017(07)
[3]墨吉明對(duì)蝦（Fenneropenaeus merguiensis）CrustinⅡ型基因的克隆與原核重組表達(dá)[J]. 劉燕,張展雄,李曉筠,梁華芳,陳兆明.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2018(01)
[4]C1q腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白4研究進(jìn)展[J]. 高潔,顧剛,陸林,王曉群.  國(guó)際心血管病雜志. 2016(02)
[5]先天免疫系統(tǒng)中肽聚糖識(shí)別蛋白研究進(jìn)展[J]. 徐鑫,劉忠淵.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2014(10)
[6]蝦類免疫因子的研究進(jìn)展[J]. 郭慧,冼健安,畢建柱,葉超霞,王安利.  飼料工業(yè). 2013(22)

博士論文
[1]蝦蟹類免疫相關(guān)基因的研究[D]. 于愛清.華東師范大學(xué) 2014
[2]十足目甲殼動(dòng)物C型凝集素功能研究[D]. 王顯偉.山東大學(xué) 2012
[3]甲殼動(dòng)物抗菌肽及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子（STAT）的基因克隆與功能分析[D]. 孫晨.山東大學(xué) 2011
[4]中國(guó)明對(duì)蝦先天免疫的模式識(shí)別與效應(yīng)分子[D]. 杜欣軍.山東大學(xué) 2007
[5]中國(guó)明對(duì)蝦（Fenneropenaeus chinensis）抗菌因子及模式識(shí)別蛋白的研究[D]. 柳峰松.中國(guó)科學(xué)院研究生院（海洋研究所） 2005

碩士論文
[1]克氏原螯蝦三個(gè)免疫相關(guān)基因Caspase-3C、Lectin和LGBP的功能研究[D]. 韓珂珂.南京師范大學(xué) 2019
[2]擬穴青蟹甲殼肽（Crustin）的免疫功能研究[D]. 王月.河南師范大學(xué) 2018
[3]三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）抗菌肽crustin的基因克隆和表達(dá)分析[D]. 宋呈文.中國(guó)科學(xué)院研究生院（海洋研究所） 2013
[4]重組家蠶抗菌肽CM4抗真菌作用機(jī)理的研究[D]. 吳希.南京師范大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3260165