銅作為一種常見的重金屬,同時(shí)又是魚類生長(zhǎng)的必需元素,它對(duì)魚類的影響已經(jīng)引起了廣泛的關(guān)注。以往的研究主要集中在氧化應(yīng)激、蓄積作用和組織學(xué)變化等方面,而關(guān)于銅對(duì)脂代謝的影響,尤其是采用離體細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷难芯窟�未見報(bào)道。本文以草魚肝細(xì)胞系為研究對(duì)象,研究了銅對(duì)草魚肝細(xì)胞脂代謝的影響以及硒的保護(hù)作用,同時(shí)以黃顙魚為研究對(duì)象,建立了黃顙魚離體肝細(xì)胞模型,研究了銅對(duì)黃顙魚離體肝細(xì)胞脂代謝的影響以及可能存在的通路。主要研究結(jié)果如下：1.以草魚肝細(xì)胞系為模型,選取3個(gè)銅濃度（0、10μM、100μM）和3個(gè)孵育時(shí)間（24h、48h、96h）來研究離體條件下銅對(duì)草魚肝細(xì)胞脂代謝的影響。研究結(jié)果表明,離體條件下銅對(duì)草魚肝細(xì)胞脂代謝的影響呈現(xiàn)劑量和時(shí)間依賴關(guān)系：孵育24h時(shí),銅降低了幾種脂肪合成和脂肪分解相關(guān)的基因表達(dá)水平；孵育48h時(shí),銅抑制了脂肪合成的過程,但上調(diào)了脂肪分解；孵育96h時(shí),與對(duì)照組相比,銅繼續(xù)上調(diào)脂肪分解作用,對(duì)脂肪合成作用沒有顯著影響,但引起脂肪消耗。盡管孵育96h脂肪合成作用有可能被上調(diào),但這不足以補(bǔ)償脂肪的消耗。本文首次研究了離體條件下銅對(duì)魚類肝細(xì)胞脂代謝的劑量和時(shí)間依賴關(guān)系,... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 魚類銅的營(yíng)養(yǎng)與毒性研究進(jìn)展
    2 魚類脂代謝研究進(jìn)展
    3 魚類細(xì)胞培養(yǎng)研究進(jìn)展
        3.1 魚類細(xì)胞培養(yǎng)現(xiàn)狀
        3.2 魚類細(xì)胞培養(yǎng)的方法
        3.3 魚類細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用
    4 本研究的目的與意義
第二章 離體條件下銅對(duì)草魚肝細(xì)胞脂代謝影響的研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑
        2.2 細(xì)胞培養(yǎng)和孵育實(shí)驗(yàn)
        2.3 細(xì)胞成活率檢測(cè)
        2.4 生化分析
        2.5 總RNA提取和熒光定量PCR
        2.6 數(shù)據(jù)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.1 銅對(duì)細(xì)胞的毒性分析
        3.2 酶活性和甘油三酯含量分析
        3.3 脂代謝相關(guān)的基因表達(dá)分析
    4 討論
        4.1 銅對(duì)細(xì)胞的毒性分析
        4.2 酶活性和甘油三酯含量分析
        4.3 脂代謝相關(guān)的基因表達(dá)分析
    5 小結(jié)
第三章 硒對(duì)體外銅誘導(dǎo)草魚肝細(xì)胞脂代謝改變的影響
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 試劑
        2.2 細(xì)胞培養(yǎng)和孵育實(shí)驗(yàn)
        2.3 細(xì)胞成活率檢測(cè)
        2.4 乳酸脫氫酶釋放率的測(cè)定
        2.5 生化分析
        2.6 總RNA提取和熒光定量PCR
        2.7 數(shù)據(jù)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.1 細(xì)胞成活率和LDH釋放率分析
        3.2 酶活性和甘油三酯含量分析
        3.3 脂代謝相關(guān)的基因表達(dá)分析
    4 討論
        4.1 細(xì)胞成活率和LDH釋放率分析
        4.2 酶活性和甘油三酯含量分析
        4.3 脂代謝相關(guān)的基因表達(dá)分析
    5 小結(jié)
第四章 銅對(duì)黃顙魚離體肝細(xì)胞脂代謝影響的研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 試劑
        2.2 黃顙魚的準(zhǔn)備
        2.3 黃顙魚原代肝細(xì)胞模型的建立
            2.3.1 組織塊法
            2.3.2 酶消化法
            2.3.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)
            2.3.4 細(xì)胞活力檢測(cè)
            2.3.5 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.4 細(xì)胞成活率檢測(cè)
        2.5 實(shí)驗(yàn)分組設(shè)計(jì)
        2.6 生化分析
        2.7 總RNA提取和熒光定量PCR
        2.8 數(shù)據(jù)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.1 黃顙魚原代肝細(xì)胞培養(yǎng)方法的建立
        3.2 銅的細(xì)胞毒性分析
        3.3 酶活性和甘油三酯含量分析
        3.4 脂代謝相關(guān)的基因表達(dá)分析
        3.5 PPARα阻斷劑GW6471對(duì)銅誘導(dǎo)基因表達(dá)和TG含量變化的抑制效應(yīng)
    4 討論
        4.1 黃顙魚原代肝細(xì)胞培養(yǎng)方法的建立
        4.2 銅對(duì)細(xì)胞的毒性分析
        4.3 酶活性和甘油三酯含量分析
        4.4 肝細(xì)胞脂代謝相關(guān)的基因表達(dá)
        4.5 PPARα阻斷劑GW6471對(duì)銅誘導(dǎo)基因表達(dá)和TG含量變化的抑制效應(yīng)
    5 小結(jié)
第五章 結(jié)語
    1 結(jié)論
    2 創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]飼料中添加氯化膽堿對(duì)草魚成魚生長(zhǎng)、脂肪沉積和脂肪代謝酶活性的影響[J]. 朱瑞俊,李小勤,謝駿,冷向軍,田娟,史少奕.  中國(guó)水產(chǎn)科學(xué). 2010(03)
[2]鎂對(duì)草魚生長(zhǎng)和脂肪代謝的影響[J]. 汪福保,羅莉,李云,林仕梅,李芹,陳時(shí),王亞哥,文華.  動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào). 2010(01)
[3]稀有鮈鯽鰭細(xì)胞系的建立及其作為測(cè)定重金屬毒性模型的探討[J]. 譚鳳霞,楊方星,王衛(wèi)民,王敏.  水生生物學(xué)報(bào). 2009(04)
[4]草魚對(duì)葡萄糖的代謝研究[J]. 劉永堅(jiān),陳竹,劉棟輝,田麗霞,鐘創(chuàng)光.  中山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 1999(S1)
[5]飼料蛋白質(zhì)水平影響草魚肝胰臟脂肪酸組成[J]. 曹俊明,關(guān)國(guó)強(qiáng),鄭文暉,劉永堅(jiān),譚炳炎.  中山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 1997(05)
[6]維生素B6對(duì)草魚脂肪代謝的影響[J]. 黃世蕉,沈竑.  水生生物學(xué)報(bào). 1992(04)
[7]NUTRITIONAL LIPID LIVER DISEASE OF GRASS CARP CTENOPHARYNGODON IDULLUS（C.et V.）[J]. 林鼎,毛永慶,蔡發(fā)盛.  Chinese Journal of Oceanology and Limnology. 1990(04)
[8]草魚種無機(jī)鹽需要量之研究[J]. 黃耀桐,劉永堅(jiān).  水生生物學(xué)報(bào). 1989(02)



本文編號(hào)：3254399