海豚鏈球菌（Streptococcus iniae, S.iniae曾用名Streptococcus shiloi）是一種重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖魚類病原菌,近年來由海豚鏈球菌感染導(dǎo)致的魚類疾病暴發(fā)頻見報(bào)端,為全球水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。莢膜是海豚鏈球菌重要的毒力因子,由多種多糖成分組成。海豚鏈球菌莢膜合成的操縱子由21個(gè)開放閱讀框構(gòu)成。cpsJ是莢膜合成操縱子中一個(gè)重要的基因,它編碼一個(gè)尿苷二磷酸葡萄糖（UDP-Glc）差向異構(gòu)酶,參與構(gòu)成莢膜的雜多糖的前體合成。本文利用溫敏載體質(zhì)粒pJRS233對(duì)cpsJ基因進(jìn)行敲除,通過同源重組將cpsJ基因置換為氯霉素抗性基因,構(gòu)建基因敲除突變株ΔcpsJ。然后分別對(duì)ΔcpsJ和野生型海豚鏈球菌進(jìn)行革蘭氏染色并鏡檢、菌落觀察、生長率測定、粘附入侵試驗(yàn)、全血?dú)缭囼?yàn)和攻毒試驗(yàn),對(duì)cpsJ的功能進(jìn)行初步研究。結(jié)果顯示突變株ΔcpsJ與野生型相比,在同等培養(yǎng)條件下,菌體形成的鏈長更長；同等培養(yǎng)條件下在THY平板上形成的菌落外觀一致但直徑更小；在生長率測定試驗(yàn)中,突變株的生長曲線到達(dá)平臺(tái)期時(shí)菌液OD600值為0.42,野生型為1.28；在粘附與入侵試驗(yàn)中,... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
文獻(xiàn)綜述
    1. 海豚鏈球菌研究進(jìn)展
        1.1 海豚鏈球菌來源及血清分型
        1.2 魚類海豚鏈球菌病的流行情況
        1.3 海豚鏈球菌的感染性
        1.4 海豚鏈球菌的致病機(jī)制
        1.5 海豚鏈球菌的毒力因子
        1.6 海豚鏈球菌的防控
    2. 海豚鏈球菌莢膜的研究進(jìn)展
        2.1 細(xì)菌莢膜概況
        2.2 細(xì)菌莢膜的作用及致病機(jī)制
        2.3 海豚鏈球菌莢膜
    3. 研究目的與意義
第一章 cpsJ基因缺失株的構(gòu)建
    1. 材料
        1.1 載體
        1.2 菌株
        1.3 主要試劑
        1.4 主要試劑及配制
        1.5 主要儀器
    2 方法
        2.1 引物設(shè)計(jì)
        2.2 海豚鏈球菌的培養(yǎng)及基因組DNA的提取
        2.3 從瓊脂糖凝膠中回收純化DNA片段(膠回收)
        2.4 基因敲除目的片段的擴(kuò)增
        2.5 感受態(tài)DH5α大腸桿菌的制備(CaCl_2法)
        2.6 感受態(tài)DGX07海豚鏈球菌的制備
        2.7 敲除重組載體的構(gòu)建
        2.8 電轉(zhuǎn)化
        2.9 敲除突變株的篩選
    3. 結(jié)果
        3.1 基因敲除目的片段和敲除載體pJRS233-ΔcpsJ的合成和鑒定
        3.2 敲除突變株的篩選和鑒定
    4. 討論
        4.1 利用同源重組進(jìn)行基因敲除的原理
        4.2 利用溫敏穿梭載體質(zhì)粒pJRS233進(jìn)行基因敲除
        4.3 突變株P(guān)CR鑒定
第二章 cpsJ基因敲除突變株的生物學(xué)特性研究
    1 材料
        1.1 菌株
        1.2 試劑
        1.3 儀器
        1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.5 主要試劑配制方法
    2. 方法
        2.1 菌體菌落形態(tài)觀察
        2.2 生長率分析
        2.3 全血存活試驗(yàn)
        2.4 粘附與入侵試驗(yàn)
        2.5 攻毒試驗(yàn)
    3. 結(jié)果
        3.1 菌體菌落形態(tài)觀察結(jié)果
        3.2 生長率測定結(jié)果
        3.3 粘附和入侵試驗(yàn)結(jié)果
        3.4 全血?dú)缭囼?yàn)結(jié)果
        3.5 攻毒試驗(yàn)結(jié)果
    4. 討論
        4.1 ⊿cpsJ突變株形成長鏈的討論
        4.2 ⊿cpsJ突變株具有較高的粘附和入侵性的討論
        4.3 ⊿cpsJ具有較低生長率的討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[4]豬鏈球菌2型的粘附作用機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 李偉,徐建國.  中國媒介生物學(xué)及控制雜志. 2008(04)
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[6]養(yǎng)殖魚類鏈球菌病病原的分離鑒定及其16S rDNA分析[J]. 周素明,李安興,馬躍,劉瑞明.  中山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2007(02)
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博士論文
[1]一株海豚鏈球菌的分離鑒定及其亞單位疫苗研究[D]. 程爽.中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所） 2010



本文編號(hào)：3239620