鯉春病毒血癥（Spring Viraemia of Carp, SVC）是一種鯉科魚類的急性、出血性的傳染病，可引發(fā)多種鯉科魚類感染，造成巨大的經(jīng)濟損失。鯉春病毒血癥病毒（SVCV）囊膜上具有G蛋白，是病毒最主要的抗原表位，同時也與病毒內(nèi)吞密切相關(guān)。單克隆抗體（MonoclonalAntibody，mAb）是由單一B細胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體，具有特異性強、靈敏度高，能夠大量制備的特點，在病毒的檢測方面具有廣闊的應(yīng)用前景，OIE推薦的SVCV檢測方法是建立在單克隆抗體基礎(chǔ)。本文重組表達鯉春病毒G蛋白片段，并制備其特異性單克隆抗體。與全病毒抗原相比，以G蛋白為抗原制備的單克隆抗體有顯著地優(yōu)勢，可簡化準備流程、提高陽性率、縮短制備周期。目前尚無以重組SVCV-G蛋白制備單克隆抗體的先例。主要結(jié)果和結(jié)論如下：1、G蛋白的表達與純化。本章擴增了SVCV G基因片段（63-1389bp），構(gòu)建pET-28a-G重組表達質(zhì)粒，實現(xiàn)了G蛋白在大腸桿菌中高效表達，表達產(chǎn)物以包涵體形式存在。這與張琳等的結(jié)果相符。通過變性、洗滌純化，獲得較純的變性蛋白，經(jīng)過透析復性后，達到免疫用... 

【文章來源】：大連海洋大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

鯉春病毒血癥病毒Fig.1-1SpringViremiaofCarp

介于 76～88kDa 之間[29]。其。Roche S 等[30]通過晶體衍鑲嵌在病毒囊膜表面，存在化和 N-糖基化，O-糖基化位白結(jié)構(gòu)，可見 G 蛋白折疊成性地結(jié)合宿主胞外受體，研制鯉春病毒基因工程疫苗[34]按照 G 基因核酸序列以亞型，其中Ⅰa、Ⅰd 變異度 蛋白的基因序列存在差異。時發(fā)生突變，病毒毒力將明的依據(jù)。

麗春紅溶液預染后剪成條帶，用 PBS 清洗； PVDF 膜置于 1% BSA 封閉，浸于 0.01mol/L 的 PBST 緩沖液，每次 5m于抗 His 單抗（1:1000 稀釋）中，37℃孵育 1h，浸于 0.01mol/L 的 PBS次 5min/3 次；加入堿性磷酸酶（AP）標記的羊抗鼠 IgG（1:3000 稀釋）育 45min。浸于 0.01mol/L 的 PBST 緩沖液，每次 5min/3 次； PVDF 膜置于 NBT/BCIP 顯色液中，暗處反應(yīng) 15min，堿性磷酸酶緩0min，加入 ddH2O 終止反應(yīng)，暗處保存。果春病毒的增殖與鑒定 細胞長成單層后進行染毒，同時設(shè)未接種的正常細胞作對照（圖 2-1，鏡下觀察感染細胞病理變化（CPE），16h 后開始出現(xiàn)空洞（圖 2-1，b），最為明顯（圖 2-1，c），表現(xiàn)為 EPC 細胞圓縮，胞質(zhì)空泡化。收集病毒懸品，電鏡下觀察到病毒呈子彈狀（圖 2-1，d）。

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3230422