維氏氣單胞菌（Aeromonas veronii）是一種人魚共患病原菌,給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大損失的同時(shí)也給公共衛(wèi)生帶來了巨大威脅,魚用疫苗因其條件限制,口服疫苗的開發(fā)具有重要意義。外膜蛋白A是一種粘附性蛋白,可加強(qiáng)機(jī)體殺菌效率,具有良好的免疫原性,具有作為DNA疫苗抗原基因的潛力,但因DNA疫苗蛋白表達(dá)量過低,無法刺激機(jī)體產(chǎn)生足夠強(qiáng)的免疫應(yīng)答,利用分子佐劑可提高其免疫效果,分子佐劑主要通過激活先天性免疫系統(tǒng)來增強(qiáng)抗原效果,包括干擾素、補(bǔ)體分子及白介素等,具有良好前景。本實(shí)驗(yàn)克隆了A.veronii TH0426株OmpAⅠ基因,鯉魚補(bǔ)體C5-Ⅰ與C5-Ⅱ基因,通過SOE-PCR將OmpAⅠ分別與C5-Ⅰ與C5-Ⅱ基因重疊擴(kuò)增。結(jié)果顯示,均可擴(kuò)增出1500 bp左右的融合基因,對(duì)融合基因進(jìn)行原核表達(dá)后構(gòu)建了錨定表達(dá)型（Lc-pPG-1-OmpAⅠ-C5-Ⅰ/Ⅱ）和分泌表達(dá)型（Lc-pPG-2-OmpAⅠ-C5-Ⅰ/Ⅱ）四種重組干酪乳桿菌。Western boltting結(jié)果顯示,兩種重組乳桿菌均可表達(dá)出58 kDa的融合蛋白,間接免疫熒光可在菌體表面檢測(cè)到熒光信號(hào);為分析重組乳桿菌的免疫... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

鯉魚肝臟組織總RNA提取M：DL2000DNAMarker1：肝臟RNA

EASY-Blunt-Zero-C5-Ⅰ 的構(gòu)建及鑒定平板(Amp 抗性)上，置于液體 LB 培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜，切驗(yàn)證，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)顯示，在 500 bp 左右處均出圖 1-2 C5-I 目的片段 PCR 擴(kuò)增M：DL2000 DNA Marker 1-2:目的片段 C5-ⅠFig.1-2 The PCR amplification product of C5-ⅠM: ：DL2000 DNA Marker 1-2: The PCR amplification product of C5I

nt-Zero-C5-Ⅰ 的構(gòu)建及鑒定 抗性)上，置于液體 LB 培養(yǎng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)顯示，在 圖 1-2 C5-I 目的片段 PCR 擴(kuò)M：DL2000 DNA Marker 1-2:目的Fig.1-2 The PCR amplification produ00 DNA Marker 1-2: The PCR amplifI

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]靶向樹突狀細(xì)胞通用型禽流感病毒重組乳酸菌的研究[D]. 楊文濤.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015

碩士論文
[1]表達(dá)維氏氣單胞菌OmpAⅠ基因重組干酪乳桿菌的構(gòu)建及免疫學(xué)評(píng)價(jià)[D]. 張冬星.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
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[3]羅非魚源維氏氣單胞菌的分離鑒定及基因分型研究[D]. 李聰.海南大學(xué) 2015
[4]低氧條件單核來源樹突狀細(xì)胞高表達(dá)C5aR1的microRNA機(jī)制研究[D]. 宋麗君.第二軍醫(yī)大學(xué) 2014
[5]以魚類過敏性毒素C5a為分子佐劑的魚類DNA疫苗開發(fā)[D]. 徐金梅.華東理工大學(xué) 2014
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本文編號(hào)：3228508