脂肪細胞可以蓄積甘油三酯（TG）以備能量的消耗。與哺乳動物相似,魚類脂肪細胞內(nèi)過度蓄脂也會引發(fā)一系列代謝疾病。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是營養(yǎng)素的敏感感受器,參與細胞內(nèi)脂質(zhì)的合成與轉(zhuǎn)運。細胞內(nèi)外因素刺激會造成內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ERS）,隨后誘發(fā)未折疊蛋白反應(yīng)（UPR）以緩解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,且經(jīng)典UPR通路及獨立于UPR通路的糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）均對哺乳動物脂肪組織和肝臟的脂質(zhì)代謝具有調(diào)控作用。但是,ERS對草魚脂肪細胞脂質(zhì)蓄積的作用尚不明確。本研究采用草魚原代脂肪細胞培養(yǎng)、基因克隆等細胞及分子生物學(xué)技術(shù),綜合分析ERS對草魚脂肪細胞脂質(zhì)蓄積的影響及作用機制。獲得的主要研究結(jié)果如下:1.油酸（OA）處理草魚脂肪細胞后脂質(zhì)代謝狀況研究為構(gòu)建脂肪細胞脂質(zhì)蓄積模型,離體條件下,通過酶消化法獲得草魚前體脂肪細胞,待前體脂肪細胞生長匯合（大約7天）,向培養(yǎng)基中加入400μM OA,48小時后收樣。采用CCK-8法測定細胞活力,尼羅紅染色和DAPI染色觀察脂肪細胞內(nèi)的脂質(zhì)蓄積情況,酶法進行甘油三酯的定量檢測,試劑盒檢測培養(yǎng)基中甘油釋放量,RT-PCR檢測脂質(zhì)代謝相關(guān)基因m RNA表達水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn):（1）400μM... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

白色、棕色、米色脂肪細胞分化主要途徑示意圖（Giraltetal.,2013）

第一章文獻綜述5和二酯酰甘油�；D(zhuǎn)移酶（diacylgycerolAcyltransferase，DGAT）異構(gòu)體（圖1-3）（Nagaietal.,2018）。此外，GPAT3的表達被PPARγ激活。因此，脂肪細胞中的PPARγ調(diào)節(jié)FA和TG的合成（Harrisetal.,2011）。本研究室發(fā)現(xiàn)，在饑餓過程中，ATGL引發(fā)脂解釋放的游離脂肪酸可以激活PPARγ，以促進FA重新酯化，從而防止過度脂解引發(fā)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及長期饑餓造成的TG過度丟失，使脂肪細胞在饑餓過程中維持脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)（孫健，2019）。1962年，MarthaVaughan首次指出，體外脂肪組織在不提供葡萄糖的情況下，會將脂解過程中由甘油三酸酯釋放的30％游離脂肪酸（freefattyacid,FFA）重新酯化為TG。而經(jīng)過60小時饑餓的人的脂肪組織、肝臟和肌肉中，脂解生成的FFA有60％被重新酯化為TG（Jensenetal.,2001）。如此高的回收率表明，脂解作用會釋放出比氧化代謝所需更多的FA，而多余的則會被重新酯化為TG。TG的高度循環(huán)很可能反映出這樣一個事實，即脂解反應(yīng)不夠靈敏，無法提供能量代謝所需的確切數(shù)量的FA。因此，生成的FA超過了所需量，將未使用的FA循環(huán)回TG。圖1-2哺乳動物組織中甘油異生途徑示意圖。從右到左依次呈現(xiàn)了哺乳動物組織中乳酸和丙酮酸轉(zhuǎn)化為甘油酯-甘油的途徑，并標明了具體的調(diào)控步驟（Nyeetal.,2008）。Fig.1-2Schematicdiagramoftheheterogeneticpathwayofglycerolinmammaliantissues.Fromrighttoleft,theconvertionoflacticacidandpyruvateintoglycerol-glycerolinmammaliantissuesispresented,andthespecificregulatorystepsareindicated(Nyeetal.,2008).圖1-3甘油-3-磷酸合成TG過程示意圖（Nagaietal.,2018）。

西北農(nóng)林科技大學(xué)碩士學(xué)位論文14200μM和400μMOA處理均能顯著增加細胞活力（*P<0.05,**P<0.01）。圖2-1油酸處理對草魚脂肪細胞活力的影響。所有數(shù)值以平均值±標準差表示，*表示差異顯著（P<0.05），**表示差異極顯著（P<0.01），n=6。Fig.2-1Theeffectofoleicacidonadipocytesviabilityingrasscarp.Allvalueswereexpressedasmean±SD.*meanssignificantdifferenceamongtwogroups(P<0.05),**meansextremelysignificantdifferenceamongtwogroups(P<0.01),n=6.2.2.2OA處理對草魚脂肪細胞脂質(zhì)蓄積的影響脂肪細胞尼羅紅染色結(jié)果見圖2-2A，發(fā)現(xiàn)200μM和400μMOA均能增加脂肪細胞內(nèi)的脂滴含量，400μMOA處理脂質(zhì)蓄積更明顯。酶法測定細胞內(nèi)TG含量的結(jié)果見圖2-2B，發(fā)現(xiàn)400μMOA能顯著增加脂肪細胞內(nèi)的TG含量（P<0.05）。圖2-2油酸處理對草魚脂肪細胞脂質(zhì)蓄積影響的表型結(jié)果。（A）不同濃度OA處理草魚脂肪細胞48h后尼羅紅染色（紅色：脂滴）和DAPI染色（藍色：細胞核）結(jié)果；（B）不同A.B.

【參考文獻】：
期刊論文
[1]PPARγ在動物脂肪發(fā)育中的研究進展[J]. 劉亞茹,苗志國,高明磊,張金洲.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2019(01)
[2]外源性脂肪酸對羅非魚脂肪細胞增殖與分化的影響[J]. 王雅文,喬芳,張美玲,賈永義,杜震宇.  水生生物學(xué)報. 2018(03)
[3]油酸誘導(dǎo)斑馬魚肝臟細胞脂滴形成與降解模型的建立[J]. 丁倩雯,張震,冉超,杜震宇,周志剛.  中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報. 2018(02)
[4]油酸誘導(dǎo)胰島素抵抗HepG2細胞模型優(yōu)化及小檗堿、黃芩苷、葛根素和甘草苷的體外降糖作用研究[J]. 朱水蘭,黎宇,嚴奉東,涂珺.  藥物評價研究. 2017(10)
[5]脂肪組織的分類及研究進展[J]. 何際洲,高博聞,程辰,李青峰.  組織工程與重建外科雜志. 2017(04)
[6]幾種細胞脂肪變性模型的建立與比較分析[J]. 羅燕,和興萍,李雪,陳朝銀,趙聲蘭.  中華中醫(yī)藥學(xué)刊. 2017(08)
[7]脂肪酸影響草魚肝細胞脂質(zhì)蓄積狀態(tài)及誘導(dǎo)其凋亡的離體研究[J]. 李雪賢,孫健,吉紅,陳昊杰.  水生生物學(xué)報. 2017(01)
[8]細胞自噬分子機制的進展[J]. 馮文之,陳揚,俞立.  生命科學(xué). 2015(07)
[9]內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與脂類代謝[J]. 孟冉,阮國良,楊代勤.  生命科學(xué). 2014(10)
[10]Role of endoplasmic reticulum stress in the pathogenesis of nonalcoholic fatty liver disease[J]. Xue-Qun Zhang,Cheng-Fu Xu,Chao-Hui Yu,Wei-Xing Chen,You-Ming Li.  World Journal of Gastroenterology. 2014(07)

博士論文
[1]營養(yǎng)限制條件下ATGL維持草魚脂肪細胞脂質(zhì)代謝穩(wěn)態(tài)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制研究[D]. 孫健.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2019
[2]草魚脂代謝相關(guān)酶的分離純化、分子克隆、酶動力學(xué)性質(zhì)及對銅和鋅的響應(yīng)研究[D]. 胡偉.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[3]飽和脂肪酸誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對肝細胞脂毒性凋亡的作用和機制探討[D]. 曹潔.重慶醫(yī)科大學(xué) 2013

碩士論文
[1]食源性棕櫚酸誘導(dǎo)斑馬魚肝臟脂毒性反應(yīng)研究[D]. 丁倩雯.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2017
[2]膽汁酸在大口黑鱸飼料中有效性及耐受性評價[D]. 張露露.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015



本文編號：3226047