鯉春病毒血癥（Spring viremia of carp, SVC）是一種由鯉春病毒血癥病毒（Spring viremia of carp virus, SVCV）引起的嚴(yán)重的傳染性急性流行病,主要影響鯉科魚(yú)類(lèi)。傳染性造血器官壞死癥（Infectious Hematopoietic Necrosis, IHN）是一種北半球鮭魚(yú)科常見(jiàn)的傳染性急性病毒病,由傳染性造血器官壞死癥病毒（Infectious Hematopoietic Necrosis Virus, IHNV）引起。SVCV和IHNV均屬于彈狀病毒科病毒。一旦發(fā)病,染病魚(yú)類(lèi)死亡率高達(dá)70%-90%,對(duì)世界水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。SVCV糖蛋白是SVCV最主要抗原,并攜帶病毒中和表位,糖蛋白基因是研制基因工程抗體的候選基因。本研究利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)在昆蟲(chóng)細(xì)胞中成功的表達(dá)了SVCV G基因,對(duì)深入研究SVCV糖蛋白的生物學(xué)活性具有重要意義。噬菌體抗體技術(shù)具有操作簡(jiǎn)單,篩選周期短,并能獲得高親和力的特異性抗體等優(yōu)點(diǎn)。因此,噬菌體抗體展示技術(shù)廣泛的應(yīng)用于抗體篩選。本實(shí)驗(yàn)利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)SVCV糖蛋白。將SVCV糖蛋白... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語(yǔ)表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 鯉春病毒血癥病毒
        1.1.1 SVCV的生物學(xué)特征
        1.1.2 SVCV基因組
        1.1.3 結(jié)構(gòu)蛋白特征
        1.1.4 SVC流行特點(diǎn)及臨床特征
    1.2 傳染性造血器官壞死病病毒
        1.2.1 IHNV的生物學(xué)特征
        1.2.2 IHNV基因組
        1.2.3 結(jié)構(gòu)蛋白特征
        1.2.4 IHN流行特點(diǎn)及臨床特征
    1.3 桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)
        1.3.1 桿狀病毒的生物學(xué)特性
        1.3.2 桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的發(fā)展
    1.4 噬菌體展示技術(shù)概述
        1.4.1 噬菌體展示技術(shù)的概念
        1.4.2 噬菌體展示系統(tǒng)
        1.4.3 噬菌體抗體庫(kù)的淘選方法
    1.5 研究目的與意義
第二章 SVCV糖蛋白在昆蟲(chóng)細(xì)胞中的表達(dá)與鑒定
    2.1 材料和方法
        2.1.1 毒株和細(xì)胞
        2.1.2 主要試劑和溶液配制
        2.1.3 引物
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.5 SVCV病毒的增殖及RNA提取
        2.1.6 糖蛋白基因的擴(kuò)增
        2.1.7 質(zhì)粒pFastBac-G的構(gòu)建
        2.1.8 大腸桿菌DH10αBac感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.1.9 重組穿梭載體Bacmid-G的構(gòu)建
        2.1.10 重組Bacmid-G的提取
        2.1.11 脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染SF9細(xì)胞
        2.1.12 重組桿狀病毒(AcNPV-G)的擴(kuò)增及鑒定
        2.1.13 表達(dá)產(chǎn)物的SDS-PAGE電泳及Western-blot檢測(cè)
        2.1.14 間接免疫熒光鑒定目的蛋白的表達(dá)
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 SVCV-G基因片段的擴(kuò)增
        2.2.2 重組轉(zhuǎn)移載體的雙酶切鑒定
        2.2.3 穿梭載體Bacmid-G的構(gòu)建
        2.2.4 重組桿狀病毒的獲得
        2.2.5 重組桿狀病毒基因組PCR鑒定
        2.2.6 表達(dá)產(chǎn)物的SDS-PAGE及Western-blot檢測(cè)
        2.2.7 間接免疫熒光鑒定目的蛋白的表達(dá)
    2.3 討論
第三章 抗SVCV噬菌體單鏈抗體淘選及鑒定
    3.1 材料與方法
        3.1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 主要試劑和溶液配制
        3.1.3 噬菌體文庫(kù)擴(kuò)增
        3.1.4 噬菌體展示文庫(kù)的拯救
        3.1.5 抗SVCV單鏈抗體的淘選
        3.1.6 陽(yáng)性克隆鑒定
        3.1.7 陽(yáng)性克隆測(cè)序
        3.1.8 可溶性單鏈抗體的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.1.9 單鏈抗體的Western blot分析
        3.1.10 可溶性單鏈抗體與SVCV結(jié)合性分析
        3.1.11 單鏈抗體的特異性分析
        3.1.12 親和力常數(shù)測(cè)定
        3.1.13 間接免疫熒光試驗(yàn)
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 抗SVCV單鏈抗體庫(kù)的淘選
        3.2.2 陽(yáng)性克隆鑒定
        3.2.3 陽(yáng)性克隆序列測(cè)定
        3.2.4 可溶性抗體的Western blot分析
        3.2.5 可溶性單鏈抗體與SVCV結(jié)合性分析
        3.2.6 特異性試驗(yàn)及親和力常數(shù)
        3.2.7 免疫熒光試驗(yàn)
    3.3 討論
第四章 抗IHNV噬菌體抗體庫(kù)的淘選與鑒定
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 輔助噬菌體擴(kuò)增
        4.1.3 輔助噬菌體滴度測(cè)定
        4.1.4 IHNV病毒純化及提純
        4.1.5 IHNV對(duì)抗體庫(kù)的淘選
        4.1.6 陽(yáng)性克隆鑒定
        4.1.7 陽(yáng)性克隆測(cè)序
        4.1.8 可溶性抗體誘導(dǎo)表達(dá)及結(jié)合特性分析
        4.1.9 特異性分析
        4.1.10 抗體親和力常數(shù)測(cè)定
        4.1.11 間接免疫熒光試驗(yàn)
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 抗IHNV噬菌體抗體的淘選
        4.2.2 陽(yáng)性克隆鑒定
        4.2.3 陽(yáng)性克隆測(cè)序
        4.2.4 可溶性單鏈抗體誘導(dǎo)表達(dá)
        4.2.5 可溶性單鏈抗體與IHNV結(jié)合性分析
        4.2.6 單鏈抗體特異性分析及親和力常數(shù)測(cè)定
        4.2.7 間接免疫熒光試驗(yàn)
    4.3 討論
參考文獻(xiàn)
碩士期間發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)及其應(yīng)用[J]. 吳懿娜,杜欣軍,張偉偉,董峰,王碩.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2010(04)
[2]魚(yú)類(lèi)傳染性造血組織壞死�。↖HN）的病毒學(xué)特征和流行病學(xué)特點(diǎn)[J]. 王光玉,陳雷,曲徑,徐仲,馬放.  水產(chǎn)科學(xué). 2007(05)
[3]魚(yú)類(lèi)彈狀病毒分子生物學(xué)研究動(dòng)態(tài)[J]. 阮紅梅,張奇亞.  中國(guó)水產(chǎn)科學(xué). 2003(06)
[4]噬菌體展示技術(shù)的原理和方法[J]. 戴和平,高宏,趙新顏.  水生生物學(xué)報(bào). 2002(04)
[5]噬菌體抗體庫(kù)幾種篩選方法的比較[J]. 王剛,劉玉峰,王琰,化冰.  第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2001(16)
[6]魚(yú)類(lèi)病毒病與魚(yú)類(lèi)病毒疫苗[J]. 吳金爐,曾志南.  海洋科學(xué). 1999(04)
[7]中國(guó)本溪虹鱒一株彈狀病毒的分離及初步研究[J]. 趙志壯,牛魯祺.  水生生物學(xué)報(bào). 1994(04)
[8]東北地區(qū)虹鱒IHN和IPN流行病學(xué)的初步研究[J]. 牛魯祺,趙志壯.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 1988(04)

博士論文
[1]家蠶核多角體病毒（BmNPV）orf126基因的功能研究[D]. 郝碧芳.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3222081