性腺發(fā)育是發(fā)育生物學研究的重要領域之一，這是一個多基因參與調控的過程。PHB（Prohibitin）被認為參與多種生物過程，包括抑制某些轉錄因子的轉錄活性、對細胞周期的負調控作用以及抑制腫瘤和細胞凋亡等。本研究采用半定量RT-PCR技術對櫛孔扇貝（Chlamys farreri）增殖期精、卵巢差異表達譜中的10個兩性差異表達序列標簽進行了驗證；RACE技術獲得phb2全長cDNA序列，采用半定量RT-PCR、real-time PCR和原位雜交技術分析了該基因在櫛孔扇貝中的空間表達以及各發(fā)育階段精巢中的表達特征。主要結果如下：半定量RT-PCR檢測，確定櫛孔扇貝10個兩性差異表達序列標簽中3個為卵巢高表達，4個為精巢高表達，一致率為40%。以其中一個精巢高表達標簽（>F0BWI0G01A0M8X）序列為基礎，RACE技術獲得一個全長為2122bp的cDNA序列，該序列含有開放閱讀框882bp，編碼293個氨基酸；經過序列比對及同源性分析初步判定其為櫛孔扇貝phb2基因，定名為Cf-phb2。櫛孔扇貝phb2的半定量RT-PCR檢測結果顯示，其在各器官中均有表達，以精巢中表達量最高... 

【文章來源】：中國海洋大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：59 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1 性腺發(fā)育相關基因的研究進展
        1.1 脊椎動物性腺發(fā)育相關基因
        1.2 無脊椎動物性腺發(fā)育相關基因
    2 PHB 家族基因的研究進展
        2.1 PHB 家族基因的序列特征
        2.2 PHB 家族成員的功能
    3 本研究的目的和意義
第二章 櫛孔扇貝性腺發(fā)育相關基因的篩選
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
            1.1.1 實驗動物
            1.1.2 工具酶、試劑盒及儀器
        1.2 實驗方法
            1.2.1 總 RNA 的提取
            1.2.2 雌雄性腺 cDNA 模板的合成
            1.2.3 半定量 RT-PCR
                1.2.3.1 設計 RT-PCR 引物
                1.2.3.2 雌雄性腺模板量的調平
                1.2.3.3 RT-PCR 分析各基因在雌雄性腺中表達的差異
    2 結果與分析
        2.1 總 RNA 的質量
        2.2 櫛孔扇貝增殖期精卵巢差異表達序列的檢驗
    3 討論
第三章 櫛孔扇貝 phb2 基因 cDNA 全長的克隆及表達
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
            1.1.1 實驗動物
            1.1.2 工具酶、試劑盒及儀器
        1.2 實驗方法
            1.2.1 性腺組織學切片的制備和性腺分期
            1.2.2 總 RNA 提取和 cDNA 模板的合成
            1.2.3 目的基因的 RACE 擴增
                1.2.3.1 引物設計
                1.2.3.2 RACE-Ready cDNA 的合成
                1.2.3.3 RACE 擴增及序列的生物信息學分析
                    1.2.3.3.1 5’-RACE 擴增
                    1.2.3.3.2 3’-RACE 擴增
            1.2.4 目的基因的全長 cDNA 獲得生物信息學分析
            1.2.5 半定量 RT-PCR
            1.2.6 相對定量 qRT-PCR 分析
            1.2.7 原位雜交
                1.2.7.1 探針的的制備
                1.2.7.2 組織原位雜交
    2 結果與分析
        2.1 目的基因全長 cDNA 的克隆及其序列的生物信息學分析
        2.2 櫛孔扇貝 phb2 基因的時空表達特征
    3 討論
        3.1 Cf-phb2 基因序列結構及同源性分析
        3.2 Cf-phb2 基因的時空表達規(guī)律及其在精子發(fā)生中的作用
        3.3 Cf-phb2 基因潛在的抑制細胞增殖的作用
總結
參考文獻
個人簡歷
待發(fā)表論文


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3207624