性腺發(fā)育是發(fā)育生物學(xué)研究的重要領(lǐng)域之一，這是一個(gè)多基因參與調(diào)控的過程。PHB（Prohibitin）被認(rèn)為參與多種生物過程，包括抑制某些轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄活性、對細(xì)胞周期的負(fù)調(diào)控作用以及抑制腫瘤和細(xì)胞凋亡等。本研究采用半定量RT-PCR技術(shù)對櫛孔扇貝（Chlamys farreri）增殖期精、卵巢差異表達(dá)譜中的10個(gè)兩性差異表達(dá)序列標(biāo)簽進(jìn)行了驗(yàn)證；RACE技術(shù)獲得phb2全長cDNA序列，采用半定量RT-PCR、real-time PCR和原位雜交技術(shù)分析了該基因在櫛孔扇貝中的空間表達(dá)以及各發(fā)育階段精巢中的表達(dá)特征。主要結(jié)果如下：半定量RT-PCR檢測，確定櫛孔扇貝10個(gè)兩性差異表達(dá)序列標(biāo)簽中3個(gè)為卵巢高表達(dá)，4個(gè)為精巢高表達(dá)，一致率為40%。以其中一個(gè)精巢高表達(dá)標(biāo)簽（>F0BWI0G01A0M8X）序列為基礎(chǔ)，RACE技術(shù)獲得一個(gè)全長為2122bp的cDNA序列，該序列含有開放閱讀框882bp，編碼293個(gè)氨基酸；經(jīng)過序列比對及同源性分析初步判定其為櫛孔扇貝phb2基因，定名為Cf-phb2。櫛孔扇貝phb2的半定量RT-PCR檢測結(jié)果顯示，其在各器官中均有表達(dá)，以精巢中表達(dá)量最高... 

【文章來源】：中國海洋大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1 性腺發(fā)育相關(guān)基因的研究進(jìn)展
        1.1 脊椎動物性腺發(fā)育相關(guān)基因
        1.2 無脊椎動物性腺發(fā)育相關(guān)基因
    2 PHB 家族基因的研究進(jìn)展
        2.1 PHB 家族基因的序列特征
        2.2 PHB 家族成員的功能
    3 本研究的目的和意義
第二章 櫛孔扇貝性腺發(fā)育相關(guān)基因的篩選
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
            1.1.2 工具酶、試劑盒及儀器
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 總 RNA 的提取
            1.2.2 雌雄性腺 cDNA 模板的合成
            1.2.3 半定量 RT-PCR
                1.2.3.1 設(shè)計(jì) RT-PCR 引物
                1.2.3.2 雌雄性腺模板量的調(diào)平
                1.2.3.3 RT-PCR 分析各基因在雌雄性腺中表達(dá)的差異
    2 結(jié)果與分析
        2.1 總 RNA 的質(zhì)量
        2.2 櫛孔扇貝增殖期精卵巢差異表達(dá)序列的檢驗(yàn)
    3 討論
第三章 櫛孔扇貝 phb2 基因 cDNA 全長的克隆及表達(dá)
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
            1.1.2 工具酶、試劑盒及儀器
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 性腺組織學(xué)切片的制備和性腺分期
            1.2.2 總 RNA 提取和 cDNA 模板的合成
            1.2.3 目的基因的 RACE 擴(kuò)增
                1.2.3.1 引物設(shè)計(jì)
                1.2.3.2 RACE-Ready cDNA 的合成
                1.2.3.3 RACE 擴(kuò)增及序列的生物信息學(xué)分析
                    1.2.3.3.1 5’-RACE 擴(kuò)增
                    1.2.3.3.2 3’-RACE 擴(kuò)增
            1.2.4 目的基因的全長 cDNA 獲得生物信息學(xué)分析
            1.2.5 半定量 RT-PCR
            1.2.6 相對定量 qRT-PCR 分析
            1.2.7 原位雜交
                1.2.7.1 探針的的制備
                1.2.7.2 組織原位雜交
    2 結(jié)果與分析
        2.1 目的基因全長 cDNA 的克隆及其序列的生物信息學(xué)分析
        2.2 櫛孔扇貝 phb2 基因的時(shí)空表達(dá)特征
    3 討論
        3.1 Cf-phb2 基因序列結(jié)構(gòu)及同源性分析
        3.2 Cf-phb2 基因的時(shí)空表達(dá)規(guī)律及其在精子發(fā)生中的作用
        3.3 Cf-phb2 基因潛在的抑制細(xì)胞增殖的作用
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡歷
待發(fā)表論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Foxl2基因在櫛孔扇貝發(fā)育過程中的表達(dá)圖式[J]. 劉曉玲,劉建國,王丹,張子炎,張志峰.  中國水產(chǎn)科學(xué). 2013(01)
[2]單環(huán)刺螠生殖腺的發(fā)生及雌體的生殖周期[J]. 李昀,王航寧,邵明瑜,張志峰.  中國海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2012(06)
[3]櫛孔扇貝Cf-dmrt4-like基因的克隆、序列特征及表達(dá)分析[J]. 馮政夫,邵明瑜,孫大鵬,張志峰.  中國水產(chǎn)科學(xué). 2010(05)
[4]Research Progress in the Structure and Functions of Prohibitin[J]. Jia-xian OU, Si-fei HUANG, Hong CHEN Department of Anatomy & Histo-Embryology, Shanghai Medical School, Fudan University, Shanghai 200032, China.  Journal of Reproduction and Contraception. 2010(02)
[5]Cloning,characterization,and expression analysis of the DEAD-box family genes,Fc-vasa and Fc-PL10a,in Chinese shrimp （Fenneropenaeus chinensis）[J]. 周倩如,邵明瑜,秦貞奎,康慶浩,張志峰.  Chinese Journal of Oceanology and Limnology. 2010(01)
[6]馬氏珠母貝Dmrt5基因的克隆及時(shí)序表達(dá)模式分析[J]. 于非非,桂建芳,周莉,王梅芳,余祥勇.  水生生物學(xué)報(bào). 2009(05)
[7]Sox基因家族功能的研究進(jìn)展[J]. 江玲霞,李紀(jì)委,賀彧,李美麗,方威,李貴強(qiáng),徐銀學(xué).  生物技術(shù)通報(bào). 2008(06)
[8]Prohibitin研究現(xiàn)狀與人類疾病[J]. 史雨,黃文彥,徐虹.  國際兒科學(xué)雜志. 2008 (05)
[9]哺乳動物性別決定機(jī)理與SRY基因調(diào)控性腺分化的研究進(jìn)展[J]. 楊宇,馬恒東.  上海畜牧獸醫(yī)通訊. 2007(03)
[10]稀有鮈鯽Dmrt基因家族13個(gè)成員的克隆與序列分析[J]. 張小艷,孫立偉,查金苗,王子健.  生態(tài)毒理學(xué)報(bào). 2007(01)

博士論文
[1]性別發(fā)育基因P450c17、DMY和Dmrt1的克隆、表達(dá)及選擇性剪接研究[D]. 余紅仕.武漢大學(xué) 2003

碩士論文
[1]櫛孔扇貝（Chlamys farreri）性別分化相關(guān)基因的篩選以及兩個(gè)相關(guān)基因的表達(dá)分析[D]. 秦貞奎.中國海洋大學(xué) 2011
[2]櫛江珧繁殖生物學(xué)及人工苗種繁育技術(shù)研究[D]. 張紅云.集美大學(xué) 2010



本文編號：3207624