從本實(shí)驗(yàn)室的翹嘴鱖（siniperca chuatsi）轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索得到Leptin-b基因部分cDNA序列,首先通過(guò)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)初步確定序列的準(zhǔn)確性,然后通過(guò)PCR、測(cè)序獲得最終準(zhǔn)確的Leptin-b部分核心cDNA序列。根據(jù)該序列,分別設(shè)計(jì)5’和3’RACE引物進(jìn)行RACE擴(kuò)增,得到Leptin-b基因5’和3’末端序列,拼接得到Leptin-b的cDNA序列。應(yīng)用Genome Walker方法獲得Leptin-b5’側(cè)翼區(qū)序列,然后克隆得到Leptin-b基因內(nèi)含子序列,拼接得到嘴鱖翹Leptin-b基因組DNA序列。Leptin-b基因的cDNA序列全長(zhǎng)為698bp,包括471bp的開(kāi)放讀碼框,編碼157aa的蛋白質(zhì),5’-untranslated region（UTR）長(zhǎng)度為130bp,3’-UTR長(zhǎng)度為94bp；推導(dǎo)的aa序列含有20個(gè)aa殘基的信號(hào)肽,兩個(gè)半胱氨酸殘基以便用于二硫鍵的形成。Leptin-b基因5’側(cè)翼區(qū)長(zhǎng)度為418bp,上游30bp處發(fā)現(xiàn)典型的TATA box,此外還存在其他調(diào)控元件：CREB（155bp）、AP2（209bp）、AP1（242... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語(yǔ)表
1 前言
    1.1 研究概述
        1.1.1 Leptin的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 Leptin的研究進(jìn)程
        1.1.3 Leptin基因的結(jié)構(gòu)
            1.1.3.1 小鼠Leptin基因的結(jié)構(gòu)
            1.1.3.2 人Leptin基因的結(jié)構(gòu)
            1.1.3.3 日本青鳉Leptin基因的結(jié)構(gòu)
            1.1.3.4 紅鰭東方鲀Leptin基因的結(jié)構(gòu)
            1.1.3.5 非洲爪蟾Leptin基因的結(jié)構(gòu)
        1.1.4 Leptin的表達(dá)組織
        1.1.5 Leptin蛋白的作用途徑
        1.1.6 Leptin的生物學(xué)功能
            1.1.6.1 Leptin與生殖
            1.1.6.2 Leptin與攝食和禁食
            1.1.6.3 Leptin與脂肪代謝
            1.1.6.4 Leptin與應(yīng)激
    1.2 本文的研究背景及內(nèi)容
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)魚(yú)
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品
    2.2 方法
        2.2.1 技術(shù)路線
        2.2.2 引物設(shè)計(jì)
        2.2.3 總RNA提取及檢測(cè)
        2.2.4 核心片段克隆
            2.2.4.1 反轉(zhuǎn)錄
            2.2.4.2 核心片段PCR反應(yīng)及檢測(cè)
            2.2.4.3 PCR產(chǎn)物純化、回收、連接及測(cè)序
        2.2.5 3’末端克隆
        2.2.6 5’末端克隆
        2.2.7 5’側(cè)翼序列克隆
        2.2.8 內(nèi)含子克隆
        2.2.9 序列拼接及進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建
        2.2.10 蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        2.2.11 基因組織表達(dá)特異性分析
            2.2.11.1 cDNA樣品的制備
            2.2.11.2 實(shí)時(shí)定量PCR
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    3.1 RNA質(zhì)量分析
    3.2 Leptin-b基因cDNA核心片段克隆
    3.3 Leptin-b基因3’末端克隆
    3.4 Leptin-b基因5’末端克隆
    3.5 翹嘴鱖Leptin-b基因cDNA全序列分析
    3.6 Leptin-b基因5’側(cè)翼區(qū)及內(nèi)含子序列克隆與分析
    3.7 Leptin-b氨基酸多重比對(duì)及進(jìn)化樹(shù)分析
    3.8 Leptin-b蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
    3.9 翹嘴鱖、草魚(yú)Leptins及其受體(Lepr)組織表達(dá)結(jié)果
4 討論
    4.1 魚(yú)類(lèi)Leptin-a和Leptin-b同源性
    4.2 翹嘴鱖同其他脊椎動(dòng)物L(fēng)eptin基因結(jié)構(gòu)、功能及系統(tǒng)進(jìn)化的關(guān)系
    4.3 翹嘴鱖、草魚(yú)Leptins基因及其受體組織表達(dá)
5 小結(jié)
參考文獻(xiàn)
碩士期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號(hào)：3198668