發(fā)布時(shí)間：2021-05-20 21:10

　　隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅猛發(fā)展,水產(chǎn)養(yǎng)殖類動(dòng)物疾病不斷出現(xiàn),造成了該產(chǎn)業(yè)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。對(duì)蝦急性肝胰腺壞死�。ˋHPND）是近年來(lái)出現(xiàn)的,一個(gè)困擾對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)的重要疾病,一直到目前為止,我們還沒(méi)有完全明確急性肝胰腺壞死病的致病機(jī)制。該病在2013年由美國(guó)亞利桑那大學(xué)的Tran等人,首次確認(rèn)并分離到了引起AHPND的病原,至此,引起AHPND的病原已經(jīng)被研究者們確認(rèn)。本實(shí)驗(yàn)室自AHPND發(fā)現(xiàn)以來(lái),就開(kāi)始了對(duì)該病的探究,本文主要是針對(duì)AHPND相關(guān)副溶血弧菌噬菌體展開(kāi)的相關(guān)探究工作。本實(shí)驗(yàn)室從養(yǎng)殖場(chǎng)取的患病凡納濱對(duì)蝦樣品中,分離并鑒定出了5株副溶血弧菌,并通過(guò)使用Flegel和Lo公布的AHPND相關(guān)質(zhì)粒檢測(cè)引物,進(jìn)行PCR檢測(cè),明確了這5株副溶血弧菌應(yīng)均為AHPND病原菌。絲裂霉素C可用于誘導(dǎo)溶源噬菌體的分離。本文通過(guò)使用不同濃度絲裂霉素C對(duì)5株AHPND致病性副溶血弧菌進(jìn)行敏感性測(cè)試,經(jīng)過(guò)比較確認(rèn)0.5μg/ml為適宜的使用濃度。通過(guò)濃度為0.5μg/ml的絲裂霉素C進(jìn)行誘導(dǎo),從5株AHPND相關(guān)副溶血弧菌中篩選出有2株副溶血弧菌（編號(hào)分別為20130629002S01和20130726001... 

【文章來(lái)源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.副溶血弧菌
    2 對(duì)蝦常見(jiàn)疾病
        2.1 白斑綜合征
        2.2 黃頭病
        2.3 桃拉病
        2.4 肌肉白濁病
        2.5 急性肝胰腺壞死病
    3. 噬菌體
    4. 鹵蟲
        4.1 鹵蟲的應(yīng)用
        4.2 鹵蟲的養(yǎng)殖概況
    5.實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        5.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR優(yōu)勢(shì)
        5.2 熒光定量PCR方法
            5.2.1 相對(duì)熒光定量PCR
            5.2.2 絕對(duì)熒光定量PCR
    6 蛋白誘導(dǎo)
    7.基因轉(zhuǎn)化方法
        7.1 轉(zhuǎn)化
        7.2 共轉(zhuǎn)化
        7.3 脂質(zhì)體導(dǎo)入法
        7.4 粒子轟擊細(xì)胞法
        7.5 直接顯微注射
        7.6 電轉(zhuǎn)化法
    8. 感受態(tài)細(xì)胞
第二章溶源副溶血弧菌的篩選
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 培養(yǎng)基
            1.1.2 儀器和試劑
            1.1.3 實(shí)驗(yàn)菌株
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株的培養(yǎng)和細(xì)菌基因組DNA的提取
            1.2.2 AHPND相關(guān)副溶血弧菌質(zhì)粒的PCR檢測(cè)
            1.2.3 絲裂霉素C有效濃度的確定
            1.2.4 噬菌體溶源性感染菌株的篩選
    2. 結(jié)果
        2.1 五株副溶血弧菌的AHPND相關(guān)質(zhì)粒的PCR檢測(cè)
        2.2 溶源性噬菌體釋放的絲裂霉素C最佳濃度的確定
        2.3 溶源性副溶血弧菌的篩選
    3.討論
第三章 溶源噬菌體的分離與電鏡觀察
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 副溶血弧菌溶源噬菌體的分離
            1.2.2 噬菌體電鏡觀察
            1.2.3 兩株副溶血弧菌抗生素敏感性測(cè)試
            1.2.4 兩株副溶血弧菌的碳源利用情況
            1.2.5 人工感染實(shí)驗(yàn)
    2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 溶源噬菌體的電鏡觀察
        2.2 兩株溶源性副溶血弧菌的抗生素敏感性
        2.3 碳源利用情況數(shù)據(jù)分析
        2.4 人工感染實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.討論
第四章 副溶血弧菌對(duì)鹵蟲無(wú)節(jié)幼體的感染實(shí)驗(yàn)
    1.材料和方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 菌液的制備
            1.2.2 鹵蟲卵的孵化
            1.2.3 鹵蟲無(wú)節(jié)幼體的感染實(shí)驗(yàn)
            1.2.4 數(shù)據(jù)分析與處理
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 鹵蟲無(wú)節(jié)幼體感染實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.2 副溶血弧菌對(duì)鹵蟲無(wú)節(jié)幼體的致病力
    3.討論
第五章 副溶血弧菌溶源噬菌體宿主范圍檢測(cè)
    1.材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑與器材
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)菌株
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 菌株的活化
            1.2.2 溶源噬菌體的提取
            1.2.3 噬菌體vp1 宿主范圍的測(cè)定
            1.2.4 噬菌體vp2 宿主范圍的測(cè)定
    2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 噬菌體vp1 宿主范圍
        2.2 噬菌體vp2 宿主范圍
    3.討論
第六章VPP19 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
    1.材料和方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 pBAD-VPP19 質(zhì)粒的提取
            1.2.2 提取質(zhì)粒質(zhì)量的驗(yàn)證
            1.2.3 SM10 和TSA-VII-2 兩株菌感受態(tài)細(xì)胞的制備
            1.2.4 電擊轉(zhuǎn)化
            1.2.5 篩選陽(yáng)性克隆
            1.2.6 陽(yáng)性單克隆的誘導(dǎo)
            1.2.7 陽(yáng)性克隆表達(dá)產(chǎn)物的SDS-PAGE
    2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 質(zhì)粒質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果
        2.2 質(zhì)粒pBAD-VPP19 的電轉(zhuǎn)化
        2.3 陽(yáng)性轉(zhuǎn)化菌株的蛋白誘導(dǎo)表達(dá)
    3.討論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[9]一株副溶血弧菌噬菌體VPp1的分離鑒定及裂解性能[J]. 彭勇,丁云娟,林洪,王靜雪.  海洋科學(xué). 2013(01)
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碩士論文
[1]五株野生型芽孢桿菌表達(dá)載體的構(gòu)建分析[D]. 許彥芬.上海海洋大學(xué) 2014
[2]生物絮團(tuán)用芽孢桿菌的檢測(cè)、標(biāo)記及其活菌高通量計(jì)數(shù)方法的建立[D]. 董萍萍.中國(guó)海洋大學(xué) 2013
[3]副溶血弧菌噬菌體的分離鑒定、裂解性能及其在副溶血弧菌快速檢測(cè)中的初步應(yīng)用[D]. 彭勇.中國(guó)海洋大學(xué) 2013
[4]副溶血弧菌噬菌體qdvp001的分離鑒定及其在牡蠣凈化中的初步應(yīng)用[D]. 丁云娟.中國(guó)海洋大學(xué) 2012
[5]三種食源性致病菌多重PCR快速檢測(cè)方法的研究[D]. 王如景.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[6]中國(guó)鹵蟲革蘭氏陰性菌結(jié)合蛋白在早期胚胎發(fā)育中的表達(dá)及抗菌機(jī)制的研究[D]. 鄭路平.遼寧師范大學(xué) 2010
[7]鹵蟲生物活性篩選模型的建立及其在竹提取物中的應(yīng)用[D]. 姚翠翠.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[8]鹵蟲無(wú)節(jié)幼體急性毒性實(shí)驗(yàn)方法的標(biāo)準(zhǔn)化研究[D]. 陳婕.天津科技大學(xué) 2009



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