殺魚(yú)愛(ài)德華氏菌和鰻弧菌是海水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)常見(jiàn)的兩種病原菌,可感染多種經(jīng)濟(jì)魚(yú)種罹患愛(ài)德華氏菌病和弧菌病。本課題選取實(shí)驗(yàn)室前期開(kāi)發(fā)的殺魚(yú)愛(ài)德華氏菌減毒活疫苗WED和鰻弧菌減毒活疫苗MVAV6203,將兩種疫苗聯(lián)合注射接種大菱鲆,通過(guò)考察接種效果分析聯(lián)合免疫過(guò)程中兩種疫苗的協(xié)同或抑制作用,并進(jìn)一步探究免疫協(xié)同或抑制的作用機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn),兩種疫苗聯(lián)合接種較單獨(dú)接種可顯著提高大菱鲆對(duì)鰻弧菌的免疫保護(hù)效果,血清特異性抗體顯著增加,與抗原識(shí)別和遞呈相關(guān)的基因如TLR2、TLR5、TLR21、MHC Ⅰ和MHC Ⅱ等在轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)量增加,證實(shí)兩種疫苗聯(lián)合免疫具有免疫協(xié)同效果。另外,本課題制備了水型和油型鰻弧菌滅活疫苗,分析了兩種類(lèi)型疫苗作為口服疫苗接種大菱鲆的免疫潛力。結(jié)果發(fā)現(xiàn),以海藻酸鈉濃度為3%（w/v）、疫苗濃度為2.5 OD600、乳化劑司盤(pán)-80添加量為0.2%、水油比為1:9、轉(zhuǎn)速為2000 r/min時(shí)制備效果最佳,但使用該疫苗口服接種大菱鲆未獲得良好免疫保護(hù)效果;選擇食品級(jí)魚(yú)油,以菌體濃度為5 OD600、油水比例為1:9、轉(zhuǎn)速為4000 r/min、乳化劑加入量為3%（w/v）時(shí)制備效果... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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摘要
Abstract
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 水產(chǎn)養(yǎng)殖病害
        1.1.1 鰻弧菌
        1.1.2 殺魚(yú)愛(ài)德華氏菌
    1.2 魚(yú)用疫苗
        1.2.1 滅活疫苗
        1.2.2 減毒活疫苗
        1.2.3 多價(jià)疫苗和聯(lián)合疫苗
    1.3 宿主對(duì)抗原的識(shí)別與遞呈
        1.3.1 病原相關(guān)分子模式和模式識(shí)別受體
        1.3.2 TLR的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
        1.3.3 抗原處理和提呈
    1.4 疫苗接種形式
        1.4.1 注射免疫
        1.4.2 浸泡免疫
        1.4.3 口服免疫
    1.5 魚(yú)類(lèi)口服疫苗
        1.5.1 微藻載體
        1.5.2 海藻酸鈉微球
        1.5.3 鹵蟲(chóng)載體
        1.5.4 納米顆粒
        1.5.5 口服免疫誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答
    1.6 研究目的和意義
第2章 減毒活疫苗MVAV6203和WED聯(lián)合免疫評(píng)價(jià)
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大菱鲆的健康檢查和馴養(yǎng)
        2.3.2 鰻弧菌MVM425和殺魚(yú)愛(ài)德華氏菌EIB202在大菱鲆上的預(yù)攻毒實(shí)驗(yàn)
        2.3.3 大菱鲆的飼養(yǎng)、免疫、攻毒以及取樣
        2.3.4 相關(guān)免疫因子應(yīng)答分析
        2.3.5 血清樣品分析
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        2.4.1 攻毒劑量的確定
        2.4.2 聯(lián)合注射免疫在大菱鲆上的免疫保護(hù)評(píng)價(jià)
        2.4.3 聯(lián)合注射免疫大菱鲆血清樣品分析
        2.4.4 實(shí)驗(yàn)討論
    2.5 本章小結(jié)
第3章 海藻酸鈉微球疫苗口服免疫大菱鲆
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 鰻弧菌MVM425在大菱鲆上腹腔預(yù)攻毒實(shí)驗(yàn)
        3.3.2 MVM425滅活菌液制備
        3.3.3 微球的制備及工藝優(yōu)化
        3.3.4 微球疫苗含量測(cè)定
        3.3.5 微球免疫效果分析
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        3.4.1 MVM425在大菱鲆上腹腔攻毒劑量確定
        3.4.2 微球制備及工藝優(yōu)化
        3.4.3 微球疫苗含量測(cè)定
        3.4.4 微球免疫效果分析
        3.4.5 實(shí)驗(yàn)討論
    3.5 本章小結(jié)
第4章 鰻弧菌乳化口服疫苗
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        4.2.1 鰻弧菌的搖瓶培養(yǎng)
        4.2.2 鰻弧菌的反應(yīng)器培養(yǎng)
        4.2.3 乳化疫苗制備工藝的優(yōu)化
        4.2.4 乳化疫苗魚(yú)食制備
        4.2.5 乳化疫苗漁場(chǎng)免疫評(píng)價(jià)
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        4.4.1 鰻弧菌的搖瓶培養(yǎng)
        4.4.2 鰻弧菌的反應(yīng)器培養(yǎng)
        4.4.3 乳化疫苗制備工藝的優(yōu)化
        4.4.4 乳化疫苗魚(yú)食制備
        4.4.5 乳化疫苗漁場(chǎng)免疫評(píng)價(jià)
        4.4.6 實(shí)驗(yàn)討論
    4.5 本章小結(jié)
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
論文發(fā)表
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]大黃魚(yú)三種病原弧菌外膜蛋白交叉保護(hù)性抗原篩選[J]. 張崇文,毛芝娟,于漣.  生物工程學(xué)報(bào). 2012(12)
[2]養(yǎng)殖大菱鲆出血性敗血癥病原菌致病性的研究及鑒定[J]. 王斌,孫岑,范薇,劉雙鳳,劉永波,孫彥珂.  大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào). 2006(02)
[3]魚(yú)用疫苗研制過(guò)程中面臨的問(wèn)題與課題[J]. 陳超然,陳昌福,毛芝娟.  河南水產(chǎn). 2002(01)
[4]鰻弧菌口服微膠囊疫苗的制備及其對(duì)鱸魚(yú)的免疫效果[J]. 余俊紅,沈繼紅,王祥紅,王寶坤,紀(jì)偉尚,胡應(yīng)劭,徐懷恕.  中國(guó)水產(chǎn)科學(xué). 2001(02)

碩士論文
[1]漁用弧菌疫苗注射佐劑的篩選和口服微粒的研制[D]. 李中權(quán).廣東海洋大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3196886