發(fā)布時間：2021-05-19 03:45

　　曼氏無針烏賊（Sepiella japonica）是我國沿海海域最重要的海洋頭足類物種,現(xiàn)人工養(yǎng)殖已經(jīng)取得突破。但養(yǎng)殖過程中普遍出現(xiàn)的性早熟現(xiàn)象嚴(yán)重影響其養(yǎng)殖效果,因此揭示養(yǎng)殖條件下的烏賊生殖發(fā)育調(diào)控機制是解決這一問題的關(guān)鍵。雌激素受體（estrogen receptor,ER）是典型的性類固醇核受體,在許多海洋動物的性成熟和生殖發(fā)育中扮演著重要角色。鑒于ER可能也參與烏賊的生殖發(fā)育調(diào)控,本文首次開展了曼氏無針烏賊雌激素受體sjER基因克隆和序列特征分析、亞細胞定位和受體類型鑒定、可能作用位點及組織分布特征、在生殖周期中變動規(guī)律及在生殖發(fā)育中的調(diào)控功能等方面的研究。主要取得的研究結(jié)果如下:采用Illumina Hiseq 2000高通量測序技術(shù)構(gòu)建了曼氏無針烏賊未成熟和成熟卵巢轉(zhuǎn)錄表達譜數(shù)據(jù)庫,經(jīng)去冗余處理和拼接處理后,共計獲得70,039條Unigenes,均長800 bp,40.7%（28,492）Unigene獲得注釋信息,其中近38.5%（10,969）Unigene獲得GO分類注釋。篩選獲得了一批性腺發(fā)育相關(guān)基因序列,未成熟卵巢轉(zhuǎn)錄組中有793條高豐富表達（FPKM≥100）... 

【文章來源】：浙江海洋大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
引言
第一章 雌激素及其受體研究綜述
    1.1 雌激素在動物生殖發(fā)育中的調(diào)控作用
    1.2 雌激素受體ER介導(dǎo)雌激素生殖調(diào)控功能的信號傳遞途徑
    1.3 雌激素及其受體在海洋無脊椎動物中的研究進展
        1.3.1 雌激素在海洋無脊椎動物中的研究進展
        1.3.2 雌激素受體在海洋無脊椎動物中的研究進展
第二章 基于轉(zhuǎn)錄組的曼氏無針烏賊生殖發(fā)育相關(guān)功能基因數(shù)據(jù)挖掘及雌激素受體ER基因解析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 總RNA提取
        2.1.3 轉(zhuǎn)錄組文庫構(gòu)建和測序
        2.1.4 數(shù)據(jù)分析和挖掘
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果統(tǒng)計
        2.2.2 unigene表達差異分析
        2.2.3 雌激素受體ER基因的數(shù)據(jù)挖掘和解析
    2.3 討論
第三章 曼氏無針烏賊雌激素受體ER基因全序列的克隆和特征分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 總RNA提取
        3.1.3 獲取sjER cDNA基因全長
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 RNA提取結(jié)果
        3.2.2 sjER cDNA基因擴增結(jié)果
        3.2.3 sjER cDNA基因全長序列的分析
        3.2.4 ER氨基酸同源序列分析
        3.2.5 ER系統(tǒng)發(fā)育分析
    3.3 討論
第四章 曼氏無針烏賊雌激素受體的亞細胞定位和受體類型鑒定
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 sjER-EGFP載體的構(gòu)建
        4.1.3 HEK293細胞培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇
        4.1.4 細胞轉(zhuǎn)染
        4.1.5 熒光染料核染和膜染
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 sjER-EGFP表達載體的構(gòu)建
        4.2.2 sjER在細胞中的定位
    4.3 討論
第五章 雌激素受體ER在曼氏無針烏賊生殖軸中的分布及在性發(fā)育周期中的變動規(guī)律研究
    5.1 材料與方法
        5.1.1 實驗材料
        5.1.2 卵巢組織學(xué)觀測
        5.1.3 不同組織總RNA提取
        5.1.4 cDNA模板合成
        5.1.5 實時熒光定量PCR
        5.1.6 性類固醇激素雌二醇E2濃度測定
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 sjER在曼氏無針烏賊生殖軸中的分布
        5.2.2 sjER及雌激素E2在曼氏無針烏賊生殖周期中的協(xié)同變動規(guī)律
    5.3 討論
        5.3.1 sjER在曼氏無針烏賊生殖軸中的分布
        5.3.2 sjER在曼氏無針烏賊生殖周期中的變動規(guī)律及其與雌激素的關(guān)系
第六章 曼氏無針烏賊雌激素受體ER介導(dǎo)的細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)功能初探
    6.1 材料與方法
        6.1.1 實驗儀器
        6.1.2 實驗試劑
        6.1.3 實驗耗材
        6.1.4 ERE-pGL3載體的構(gòu)建
        6.1.5 Flag-sjER
        6.1.6 HEK293細胞培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇
        6.1.7 細胞轉(zhuǎn)染
        6.1.8 ERE-pGL3含量檢測
        6.1.9 Ca~(2+)流檢測
        6.1.10 cAMP含量檢測
    6.2 結(jié)果與分析
        6.2.1 曼氏無針烏賊雌激素受體激活ERE靶基因的作用特性分析
        6.2.2 Ca~(2+)檢測
        6.2.3 cAMP檢測
    6.3 討論
        6.3.1 曼氏無針烏賊雌激素受體激活ERE靶基因的作用特性分析
        6.3.2 雌激素受體介導(dǎo)的cAMP信號途徑及Ca~(2+)流的檢測
參考文獻
致謝
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
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[6]性類固醇激素對鯉魚腦垂體生長激素基因表達的影響[J]. 李文笙,林浩然.  動物學(xué)報. 2000(02)
[7]ERβ──一種新型的雌激素受體[J]. 黃朝暉,王金福.  生命科學(xué). 2000(03)
[8]烏賊生殖系統(tǒng)標(biāo)本的制作[J]. 陳海燕.  麗水師專學(xué)報. 1991(S1)
[9]鯉魚血清中促性腺激素、17β雌二醇含量的周年變化[J]. 黃世蕉,姜仁良,趙維信,周洪琪.  水產(chǎn)學(xué)報. 1987(01)
[10]曼氏無針烏賊的人工孵化及其在資源增殖中作用的估計[J]. 李星頡,戴健壽.  海洋漁業(yè). 1982(01)

碩士論文
[1]溫度和光照對曼氏無針烏賊繁殖性能的影響[D]. 平洪領(lǐng).浙江海洋學(xué)院 2015
[2]環(huán)境雌激素17β-E2對櫛孔扇貝內(nèi)分泌干擾的作用機制[D]. 劉穎.大連海洋大學(xué) 2014



本文編號：3195049