魚類性別決定具有高度可塑性,性別決定與分化由遺傳和環(huán)境因素共同決定。在環(huán)境因素中,溫度變化能夠在部分魚類的性別分化期影響其性腺分化的命運,改變?nèi)后w性比。同時,在這一時期,硬骨魚類在卵巢中合成內(nèi)源性雌激素,并作為卵巢分化的自然引導(dǎo)者。眾多研究表明,內(nèi)源性類固醇激素的變化,甚至可以掩蓋遺傳因素,改變性腺分化的方向。尼羅羅非魚是一種性別分化方向受到基因和溫度雙重影響的魚類,即在性別分化期,溫度能夠改變其性別分化的方向,而溫度是如何影響其性別分化的,即高溫條件下內(nèi)源雌激素是否通過其水平變化驅(qū)動這種分化方向的改變?雌激素的變化水平又如何,具體的分子機制是什么,目前仍不清楚。本研究通過野生雌魚（XX）與偽雄魚（XX）雜交,獲取了三個尼羅羅非魚全雌家系。因為Letrozole能特異降低E2的水平,所以為了探究在羅非魚性腺分化早期,高溫處理對性類固醇激素水平與群體雄性率的影響,以及二者的對應(yīng)關(guān)系,分別設(shè)置雌魚對照組,雄魚對照組,高溫36℃處理組（XX+HT）和不同濃度Letrozole處理組,對比分析高溫和Letrozole在性別分化早期下調(diào)E2水平的能力。結(jié)果顯示,雖然在高溫處理早期（13dpf）羅... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
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中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 脊椎動物的性別決定機制
        1.1.1 遺傳性別決定機制
        1.1.2 溫度性別決定機制
        1.1.3 基因-溫度性別決定
    1.2 溫度對魚類性別決定與分化的影響
    1.3 性類固醇激素對魚類性別決定與分化的影響
    1.4 魚類性別逆轉(zhuǎn)研究現(xiàn)狀
    1.5 尼羅羅非魚簡述
        1.5.1 尼羅羅非魚的性別決定機制
        1.5.2 溫度對尼羅羅非魚性別決定與分化的影響
        1.5.3 外源性激素與芳香化酶抑制劑對尼羅羅非魚性別決定與分化的影響
    1.6 尼羅羅非魚性腺細胞的分化
    1.7 參與尼羅羅非魚性別決定與分化的關(guān)鍵基因
        1.7.1 芳香化酶基因
        1.7.2 Dmrt1 基因
    1.8 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 尼羅羅非魚家系的建立
        2.1.2 實驗設(shè)計
        2.1.3 實驗儀器與試劑
        2.1.4 主要試劑及耗材
        2.1.5 所用試劑的配制
        2.1.6 主要數(shù)據(jù)庫及軟件
    2.2 試驗方法
        2.2.1 尼羅羅非魚性腺總RNA的提取
        2.2.2 RNA檢測及定量
        2.2.3 qRT-PCR檢測Cyp19a1a和 Dmrt1 的表達量
        2.2.4 通過性連鎖分子標記篩選遺傳雄魚(XY)
        2.2.5 性類固醇激素水平檢測
        2.2.8 石蠟切片的制作及HE染色
        2.2.9 原位雜交檢測性腺組織Cyp19a1a和 Dmrt1的mRNA表達
        2.2.10 免疫組化檢測性腺組織Cyp19a1a和 Dmrt1 的蛋白表達
        2.2.11 Western Blot
        2.2.12 亞硫酸氫鹽測序
        2.2.13 統(tǒng)計分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 正常雄魚的鑒定
    3.2 高溫處理及各處理家系性逆轉(zhuǎn)率的確定
    3.3 高溫和Letrozole處理對羅非魚性腺內(nèi)性激素水平和雄性率的差異比較分析
    3.4 高溫處理對Cyp19a1a mRNA和蛋白表達水平的影響
    3.5 高溫處理對尼羅羅非魚性腺內(nèi)芳香化酶活性的影響
    3.6 高溫處理對尼羅羅非魚Cyp19a1a啟動子區(qū)甲基化水平的影響
    3.7 高溫處理對Dmrt1 mRNA和蛋白表達水平的影響
4 討論
    4.1 高溫和Letrozole處理對羅非魚性腺內(nèi)性激素水平與雄性率的差異比較分析
    4.2 高溫處理對尼羅羅非魚性腺中Cyp19a1a蛋白表達水平和芳香化酶活性的影響
    4.3 高溫處理對尼羅羅非魚Cyp19a1a啟動子區(qū)甲基化水平和mRNA表達水平的影響
    4.4 高溫處理對尼羅羅非魚Dmrt1 mRNA和蛋白表達水平的影響
5 結(jié)論
參考文獻
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]脊椎動物性別決定和分化的分子機制研究進展[J]. 周林燕,張修月,王德壽.  動物學(xué)研究. 2004(01)



本文編號：3193958