條紋鋸鮨在性逆轉(zhuǎn)過(guò)程中的組織生理學(xué)變化和相關(guān)基因的克隆及表達(dá)特征分析
發(fā)布時(shí)間:2021-05-10 04:49
條紋鋸鮨(Centropristis20striata)是一種名貴的海水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi),肉質(zhì)豐腴、味道鮮美,深受消費(fèi)者的青睞。目前由于人工繁育中常常存在雄性親魚(yú)高齡化、雌雄生殖不同步和雄魚(yú)缺乏等現(xiàn)象,很大程度上限制了條紋鋸鮨人工繁育工作的進(jìn)行。因此,探明條紋鋸鮨性逆轉(zhuǎn)的機(jī)理,利用人工方法提早使雌魚(yú)轉(zhuǎn)雄,是大規(guī)模人工繁殖的關(guān)鍵。本研究通過(guò)外源埋置的方法誘導(dǎo)條紋鋸鮨性別轉(zhuǎn)化,得到功能性的雄魚(yú),同時(shí)使用組織學(xué)、生理學(xué)、分子生物學(xué)的方法對(duì)誘導(dǎo)的效果進(jìn)行分析,旨在為大批量人工苗種生產(chǎn)研究提供理論參考。1條紋鋸鮨性逆轉(zhuǎn)過(guò)程中的組織學(xué)及生理學(xué)變化為探討條紋鋸鮨性逆轉(zhuǎn)過(guò)程中內(nèi)分泌調(diào)節(jié)機(jī)理,本文采用藥條埋置的方法,將17α-甲基睪酮(17α-MT)和芳香化酶抑制劑藥條單獨(dú)和混合埋置到1+齡條紋鋸鮨肌肉中,觀察并分析性別轉(zhuǎn)換過(guò)程中其組織學(xué)特征和生理學(xué)變化。結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,實(shí)驗(yàn)組條紋鋸鮨已轉(zhuǎn)化為功能性雄魚(yú),并獲得有活力的精子,而對(duì)照組僅有少數(shù)個(gè)體轉(zhuǎn)雄。(1)實(shí)驗(yàn)組條紋鋸鮨性腺成熟系數(shù)先降低后升高,而對(duì)照組則變化不顯著。隨著埋置藥條次數(shù)增加實(shí)驗(yàn)組魚(yú)外觀呈出明顯的婚姻色,并可以看到頭部的脂肪突起,解剖后性腺已由...
【文章來(lái)源】:上海海洋大學(xué)上海市
【文章頁(yè)數(shù)】:82 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
摘要
ABSTRACT
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述
1 石斑魚(yú)繁殖生物學(xué)
1.1 人工繁殖研究概況
1.2 雌雄同體與性轉(zhuǎn)化
2 石斑魚(yú)性逆轉(zhuǎn)的誘導(dǎo)及調(diào)控機(jī)理
2.1 石斑魚(yú)性逆轉(zhuǎn)的生殖內(nèi)分泌調(diào)節(jié)機(jī)理
3 性別決定與性別分化的分子基礎(chǔ)
3.1 Sox9基因
3.2 Dmrt1基因
3.3 WT1基因
3.4 Sf1基因
3.5 Cyp19基因
3.6 Foxl2基因
第二章 17α-甲基睪酮及芳香化酶抑制劑對(duì)條紋鋸鮨性逆轉(zhuǎn)的影響
1 材料方法
1.1 實(shí)驗(yàn)魚(yú)
1.2 埋置藥條的制備
1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和樣品處理
1.4 組織學(xué)觀察
1.5 血清中性類(lèi)固醇激素的測(cè)定
1.6 芳香化酶活性的測(cè)定
1.7 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
2.1 埋置 17α-甲基睪酮和芳香化酶抑制劑對(duì)條紋鋸鮨性腺發(fā)育、性腺成熟系數(shù)及排精率的影響
2.2 埋置 17α-MT、芳香化酶抑制劑對(duì)條紋鋸鮨血清中性類(lèi)固醇激素的影響
2.3 埋置 17α-MT、芳香化酶抑制劑對(duì)條紋鋸鮨腦芳香化酶活性的影響
3 討論
第三章 Dmrt1基因的克隆及表達(dá)分析
1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
1.1 實(shí)驗(yàn)材料
1.2 實(shí)驗(yàn)耗材與試劑
2 實(shí)驗(yàn)方法
2.1 引物設(shè)計(jì)
2.2 總RNA的提取
2.3 cDNA部分片段的克隆
2.4 cDNA序列的 3’和 5’RACE克隆
2.5 cDNA的序列分析與結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
2.6 熒光定量PCR檢測(cè)Dmrt1表達(dá)量
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.1 Dmrt1全長(zhǎng)cDNA序列的獲得及序列特征
3.2 同源性分析
3.3 Dmrt1在成體不同組織中及性逆轉(zhuǎn)過(guò)程中性腺中的表達(dá)
4 討論
第四章 Foxl2基因的克隆及表達(dá)分析
1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
2 實(shí)驗(yàn)方法
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.1 Foxl2全長(zhǎng)cDNA序列的獲得及序列特征
3.2 同源性分析
3.3 Foxl2基因在成體不同組織中及性逆轉(zhuǎn)過(guò)程中性腺中的表達(dá)
4 討論
4.1 Foxl2基因的克隆及序列分析
4.2 Foxl2基因在條紋鋸鮨雌雄成體不同組織中的表達(dá)
4.3 Foxl2基因在誘導(dǎo)條紋鋸鮨性逆轉(zhuǎn)期間性腺中的表達(dá)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
本文編號(hào):3178710
【文章來(lái)源】:上海海洋大學(xué)上海市
【文章頁(yè)數(shù)】:82 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
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摘要
ABSTRACT
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述
1 石斑魚(yú)繁殖生物學(xué)
1.1 人工繁殖研究概況
1.2 雌雄同體與性轉(zhuǎn)化
2 石斑魚(yú)性逆轉(zhuǎn)的誘導(dǎo)及調(diào)控機(jī)理
2.1 石斑魚(yú)性逆轉(zhuǎn)的生殖內(nèi)分泌調(diào)節(jié)機(jī)理
3 性別決定與性別分化的分子基礎(chǔ)
3.1 Sox9基因
3.2 Dmrt1基因
3.3 WT1基因
3.4 Sf1基因
3.5 Cyp19基因
3.6 Foxl2基因
第二章 17α-甲基睪酮及芳香化酶抑制劑對(duì)條紋鋸鮨性逆轉(zhuǎn)的影響
1 材料方法
1.1 實(shí)驗(yàn)魚(yú)
1.2 埋置藥條的制備
1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和樣品處理
1.4 組織學(xué)觀察
1.5 血清中性類(lèi)固醇激素的測(cè)定
1.6 芳香化酶活性的測(cè)定
1.7 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
2.1 埋置 17α-甲基睪酮和芳香化酶抑制劑對(duì)條紋鋸鮨性腺發(fā)育、性腺成熟系數(shù)及排精率的影響
2.2 埋置 17α-MT、芳香化酶抑制劑對(duì)條紋鋸鮨血清中性類(lèi)固醇激素的影響
2.3 埋置 17α-MT、芳香化酶抑制劑對(duì)條紋鋸鮨腦芳香化酶活性的影響
3 討論
第三章 Dmrt1基因的克隆及表達(dá)分析
1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
1.1 實(shí)驗(yàn)材料
1.2 實(shí)驗(yàn)耗材與試劑
2 實(shí)驗(yàn)方法
2.1 引物設(shè)計(jì)
2.2 總RNA的提取
2.3 cDNA部分片段的克隆
2.4 cDNA序列的 3’和 5’RACE克隆
2.5 cDNA的序列分析與結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
2.6 熒光定量PCR檢測(cè)Dmrt1表達(dá)量
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.1 Dmrt1全長(zhǎng)cDNA序列的獲得及序列特征
3.2 同源性分析
3.3 Dmrt1在成體不同組織中及性逆轉(zhuǎn)過(guò)程中性腺中的表達(dá)
4 討論
第四章 Foxl2基因的克隆及表達(dá)分析
1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
2 實(shí)驗(yàn)方法
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.1 Foxl2全長(zhǎng)cDNA序列的獲得及序列特征
3.2 同源性分析
3.3 Foxl2基因在成體不同組織中及性逆轉(zhuǎn)過(guò)程中性腺中的表達(dá)
4 討論
4.1 Foxl2基因的克隆及序列分析
4.2 Foxl2基因在條紋鋸鮨雌雄成體不同組織中的表達(dá)
4.3 Foxl2基因在誘導(dǎo)條紋鋸鮨性逆轉(zhuǎn)期間性腺中的表達(dá)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
本文編號(hào):3178710
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