細(xì)菌性疾病是威脅水產(chǎn)養(yǎng)殖魚類健康的主要原因之一。長(zhǎng)期以來(lái)，采用化學(xué)制劑和抗生素類藥物治療魚病，不僅病原菌耐藥性增強(qiáng)，還會(huì)使魚體藥物殘留而對(duì)人類造成間接地傷害。魚類疾病控制正在向用魚用疫苗放置方向發(fā)展。魚病的疫苗免疫防治技術(shù)是最佳的魚病防治策略，但魚類的特殊生活環(huán)境，注射和口服免疫接種的方式都不是最優(yōu)途徑，浸泡則成為魚用疫苗的首選。為了增強(qiáng)浸泡疫苗的免疫保護(hù)效果，本研究以前期篩選出的皂角苷為佐劑，以甲醛滅活鰻弧菌疫苗，以大菱鲆為實(shí)驗(yàn)魚類，從魚類非特異性免疫和特異性免疫兩個(gè)方面，對(duì)皂角苷的佐劑功能進(jìn)行評(píng)價(jià)，以期從分子水平上闡明皂角苷佐劑的免疫機(jī)理。第一部分，以不同濃度的皂角苷（15mg/L、35mg/L）為佐劑，用滅活鰻弧菌為浸泡疫苗免疫大菱鲆，采用腹腔注射為陽(yáng)性對(duì)照組，對(duì)免疫后不同時(shí)間段內(nèi)各主要免疫器官（皮膚、鰓、頭腎、脾臟和腸組織）中各主要免疫相關(guān)基因的表達(dá)量進(jìn)行了定量分析。結(jié)果表明，在兩組皂角苷佐劑聯(lián)合浸泡疫苗組的大菱鲆的鰓組織中，MHCⅡα基因在浸泡的4⁸h內(nèi)，即表現(xiàn)出顯著的表達(dá)，相對(duì)表達(dá)量分別為136.3和378.5，1d后表達(dá)量迅速降低。高濃度的皂角苷組及... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 大菱鲆（Scophthalmus maximus）
    1.2 魚類的免疫器官
        1.2.1 胸腺
        1.2.2 頭腎
        1.2.3 脾
        1.2.4 黏膜相關(guān)淋巴組織(MALT)
    1.3 魚類的免疫應(yīng)答
    1.4 非特異性免疫相關(guān)指標(biāo)
        1.4.1 溶菌酶
        1.4.2 堿性磷酸酶
        1.4.3 吞噬作用
        1.4.4 補(bǔ)體
    1.5 特異性免疫相關(guān)細(xì)胞因子
        1.5.1 主要組織相容性復(fù)合體(MHC)
        1.5.2 白介素 1（IL-1）
        1.5.3 TNF-α
    1.6 魚類疫苗
    1.7 免疫佐劑
        1.7.1 佐劑的作用原理
        1.7.2 免疫佐劑的分類
        1.7.3 影響佐劑效果的的因素
    1.8 皂角苷
第二章 皂角苷對(duì)大菱鲆重要免疫基因表達(dá)的影響
    2.1 前言
    2.2 材料方法
        2.2.1 大菱鲆和皂角苷
        2.2.2 鰻弧菌疫苗制備
        2.2.3 分組、免疫和取樣
        2.2.4 RNA 提取和 cDNA 的合成
        2.2.5 qPCR 檢測(cè)各個(gè)基因的表達(dá)
        2.2.6 數(shù)據(jù)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 總 RNA 提取及檢測(cè)
        2.3.2 大菱鲆β-actin 基因、MHCⅡα基因、IL-1β基因、TNF-α基因Real-TimePCR 中溶解曲線分析
        2.3.3 MHCⅡα基因在各個(gè)組織中的表達(dá)
        2.3.4 IL-1β基因的表達(dá)分析
        2.3.5 TNF-α在組織中的表達(dá)
        2.3.6 大菱鲆不同部位的皮膚中三種基因表達(dá)分析
    2.4 討論
第三章 皂角苷對(duì)大菱鲆非特異性免疫的影響
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)分組
        3.2.3 樣品的提取和制備
        3.2.4 白細(xì)胞吞噬活力
        3.2.5 補(bǔ)體旁路途徑溶血活性（ACH50）
        3.2.6 溶菌酶活力
        3.2.7 抑菌活力測(cè)定
        3.2.8 AKP 活力
        3.2.9 血清總蛋白濃度的測(cè)定
        3.2.10 數(shù)據(jù)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 皂角苷對(duì)白細(xì)胞吞噬活力的影響
        3.3.2 血清補(bǔ)體旁路途徑溶血活性
        3.3.3 血清及黏液中溶菌酶活力
        3.3.4 抑菌活力測(cè)定
        3.3.5 AKP 活力
        3.3.6 血清總蛋白含量
    3.4 討論
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷
攻讀學(xué)位期間科研成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]皂角苷對(duì)大菱鲆血細(xì)胞的溶血作用[J]. 王玉娟,王秀華,韓雯,王銳,黃倢.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2013(07)
[2]飼料中維生素C對(duì)七彩神仙魚仔幼魚非特異性免疫的影響[J]. 廖暢宇,邵力,王旭霞.  漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展. 2012(03)
[3]人參皂甙Rg1對(duì)體外人胃癌細(xì)胞增殖的抑制作用及機(jī)制[J]. 商義,張才全.  中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2011(03)
[4]黃芪對(duì)半滑舌鰨非特異免疫活性的影響[J]. 劉金海,王宏志,王文陽(yáng).  飼料工業(yè). 2011(02)
[5]魚類抗病毒非特異性免疫機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 王亞楠,孔曉瑜,史成銀.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2008(05)
[6]肽聚糖對(duì)鯽魚嗜水氣單胞菌滅活疫苗免疫增強(qiáng)效果的研究[J]. 郭玉娟,陳學(xué)年.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2006(01)
[7]免疫佐劑作用機(jī)理的研究進(jìn)展[J]. 孫紅祥,潘杭君.  中國(guó)獸藥雜志. 2005(10)
[8]ISCOMATRIXTM佐劑:細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答的有效誘導(dǎo)劑[J]. 王斌,徐苗.  國(guó)外醫(yī)學(xué)(預(yù)防、診斷、治療用生物制品分冊(cè)). 2005(05)
[9]飼料中添加杜仲提取物養(yǎng)殖奧尼魚的試驗(yàn)[J]. 姚紅梅,肖克宇,鐘蕾.  淡水漁業(yè). 2005(02)
[10]鯽魚對(duì)不同劑量α-甘露聚糖肽免疫應(yīng)答的研究[J]. 王高學(xué),徐翔.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2005(03)

碩士論文
[1]兩種佐劑對(duì)大菱鲆鰻弧菌浸泡疫苗免疫效果的影響[D]. 王玉娟.上海海洋大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3173763